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【目的】NOTCH基因在进化过程中高度保守并在机体发育过程中发挥着重要的作用。NOTCH在肿瘤中的作用较为复杂,既可发挥癌基因的作用也可发挥抑癌基因的功能。在头颈癌中,NOTCH的功能仍不清楚。最近有文献报道了NOTCH在头颈癌中突变率仅次于TP53,高达到15-20%,同时推测NOTCH在头颈癌中可能以抑癌基因的形式存在。这与急性淋巴细胞白血病中NOTCH的突变类型截然不同。考虑到NOTCH在白种人头颈癌中较高的突变率,以及不同人种基因型可能存在的差异,本实验首次以头颈癌中较为常见的口腔黏膜鳞状细胞癌(口腔鳞癌)为研究对象研究中国人群口腔鳞癌中NOTCH1基因的突变情况,以了解中西方不同种族口腔鳞癌中NOTCH1基因突变的差异。另外,由于文献报道NOTCH信号通路的重要调控蛋白PRESENILIN1(PS1)可以负调控表皮生长因子受体(EGFR),因此有必要研究PS1在口腔鳞癌中的表达及其与EGFR之间的关系。【方法】1:从51例口腔鳞状细胞癌及其中46例匹配的正常组织的石蜡包埋组织中获取基因组DNA,应用Ion-Torrent平台行NOTCH1及TP53基因的全外显子测序。2:分析NOTCH1、TP53基因突变与临床病理指标以及预后等的相关性;3:免疫组织化学及定量RT-PCR检测口腔鳞癌细胞系及原发性口腔鳞癌组织标本中PS1的表达;4:使用siRNA干扰口腔鳞癌细胞内PS1的表达,并用流式细胞技术检测PS1基因沉默后细胞增殖、凋亡的改变;5:定量RT-PCR检测头颈癌组织中PS1和EGFR表达的关系,免疫印迹检测PS1沉默后对EGFR信号通路的影响。【结果】在51例中国人群口腔鳞癌病例中,发现156个位点的NOTCH1点突变,包括35个错义突变和7个无义突变,分布在22例标本中(43.1%)。与以往研究不同的是发现了12个可能是功能获得性的突变位点;具有NOTCH1突变的病例无病生存时间(P=0.0042)和总生存时间(P=0.001)显著缩短。单因素及多因素Cox回归分析表明NOTCH1突变可以成为独立预测口腔鳞癌预后的指标(P=0.001),NOTCH1突变且有淋巴结转移的15例患者术后2年内均发生复发或转移。发现TP53基因错义突变21个,无义突变4个,分布在21个病例中(41%)。TP53突变与临床病理指标及预后皆没有相关性。对于PS1的研究,结果发现PS1在口腔鳞癌的表达显著增高,且与EGFR的表达呈正相关。PS1基因沉默抑制口腔鳞癌细胞的增殖并诱导细胞凋亡。PS1基因沉默降低EGFR的表达及EGFR-STAT信号通路的活性。【结论】中国人口腔鳞癌中NOTCH1突变更为频繁且更为复杂。NOTCH1突变联合淋巴结转移可能作为口腔鳞癌更好的预后指标。同时考虑到PS1在头颈癌的表达显著增高并影响着EGFR的信号通路,NOTCH1信号通路在口腔鳞癌中的改变可能产生了重要的调控作用。