随着生活质量水平的提高,肉制品生产量达到了人类历史上前所未有的数量。肉制品的掺杂、掺假行为,动物疫病蔓延,宗教对肉制品的禁忌以及珍稀动物保护等问题,已受到当前社会热切关注。利甩PCR技术鉴别动物源性成分来源是打击违法违规行为的科学依据,同时也是保护珍稀动物的有力保障。本文通过遗传生物学方法,力争鉴别动物源性成分来源于不同物种间和在不同品种间。同时也利用PCR技术精确快速的特性,来对动物源性成分及含量进行定性分析和定量检测。本实验的研究分为三部分：(1)基于国际生命条码联盟(CBOL, the Consortium for the Barcode of Life)提出的Bar coding技术所确定的序列区域。通过NCBI查询和Oligo6.0和Primer5.0软件的筛选,得到了CO Ⅰ基因的通用引物,可以扩增牛、羊、猪、家禽、家兔、犬和猫七个物种的CO Ⅰ基因片段。然后使用Vector NTI.11.5软件,筛选了AfaⅠ做为本试验的限制性内切酶。结果显示,牛、羊、猪、家禽、家兔、犬和猫七个物种能被AfaⅠ限制性内切酶切成不同片段,从而鉴别出不同物种的动物源性成分。(2)根据mtDNA中CO Ⅰ基因序列的保守性和适度进化特性,设计了Realtime-PCR的熔解曲线法,检测猪源性成分的来源,即加快了检测的速度,也增加了同时检测样品的数量。同时,为了避免食品中PCR抑制剂的影响,本试验设置GCG基因125bp的纯化片段为内参照,控制假阴性结果的出现。通过优化PCR反应条件,猪和GCG基因的特异性产物分别在79.2℃和75℃有特异性熔解峰。设置牛、羊、家禽、家兔、鼠和空白对照,均无特异性扩增。测序结果表明,该猪特异性引物的PCR产物长度为245bp,其核酸序列与NCBI中相应序列吻合。0.001%为该方法的LOV值。(3)利用功能性蛋白基因在不同品种间的差异来鉴别动物源性成分的来源。首先,我们要选择遗传高度保守性遗传的品种,本实验选择了五指山猪(WZSP)和杜洛克猪作为鉴别对象,通过文献了解到WZSP和普通体型猪在GHR基因上有多个SNP位点,其中有两个SNP位点是有意突变,且改变了蛋白质的构象,影响了生长激素的作用。猪的GHR基因序列是根据NCBI上SusCrafa物种查询得到的,根据已报道的引物。扩增WZSP和杜洛克猪的GHR基因得到序列产物,再根据信息利用Vector NTI.11.5软件筛选内切酶PstⅠ。实验结果显示,经过内切酶PstⅠ消化酶切后WZSP的GHR基因扩增产物的序列会出现2条带,而普通体型猪杜洛克则出现一条带,说明该方法成功的鉴别出了动物源性成分在不同品种间的来源。通过混合检测,该方法的检出限(LOD)为5%。LOD值较高的原因可能是功能性蛋白基因与线粒体基因相比,在单个细胞内基因数量上要少很多,且GHR基因序列较长,容易降解断裂。该实验的目的主要是为了利用DNA-Barcoding技术建立同时鉴别不同物种源性成分以及批量检测猪源性成分的方法。然后在鉴别物种的基础上,利用GHR基因的SNPs位点来鉴别品种五指山猪源性的成分。同时也为鉴定机构制定检测标准奠定基础,为以后动物源性成分检测技术的创新提供依据。