论文部分内容阅读
[目的]采用分子生物学相关方法检测不同浓度IL-6(interleukin-6)在雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3及DU145中对酪氨酸蛋白激酶JAK1(janus kinase 1)、信号转导与转录激活因子 STAT3(signal transducer and activator of transcription 3)和细胞周期蛋白Dl(Cyclin D1)表达的影响,从而探讨IL-6对信号通路上关键靶蛋白的激活作用及对下游目的蛋白的调控作用,阐述前列腺癌发生发展过程中一些新机制。[方法]1.应用细胞增殖活性技术(CCK-8)检测雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3和DU145在经不同浓度IL-6作用后细胞增殖的相关生物学行为。2.应用实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术检测雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3和DU145在经不同浓度IL-6作用后Cyclin D1在转录水平的表达情况。3.应用蛋白质印迹法(Western Bolt)技术检测雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3和DU145在经不同浓度IL-6作用后JAK1、STAT3、CyclinD1在翻译水平的表达情况。[结果]1.不同浓度IL-6对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3和DU145细胞增殖的影响。(1)采用CCK-8法,将浓度分别为Ong/ml、50ng/ml、100ng/ml的IL-6作用于PC-3细胞株,在12h、24h测量时间点实验组50ng/ml组、100ng/ml组与对照组Ong/ml组的0D值相比,差异有统计学差异,且呈现出浓度依赖性相关,结果表明IL-6能够促进PC-3的增殖。(2)采用CCK-8法,将浓度分别为Ong/ml、50ng/ml、100ng/ml的IL-6作用于DU145细胞株,在12h、24h测量时间点实验组50ng/ml组、100ng/ml组与对照组0ng/ml组的OD值相比,差异有统计学差异,且呈现出浓度依赖性相关,结果表明IL-6能够促进DU145的增殖。2.IL-6对前列腺癌细胞株PC-3和DU145中CyclinDl在转录水平的影响。前列腺癌细胞株PC-3和DU145经不同浓度IL-6(0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)作用24h后,Cyclin D1在转录水平有不同程度上调,Cyclin D1在转录水平的上调程度与IL-6浓度呈正相关。3.IL-6对前列腺癌细胞株PC-3、DU145中JAK1、STAT3和Cyclin D1在翻译水平的影响。(1)对JAK1的影响:本研究发现前列腺癌细胞PC-3和DU145经不同浓度IL-6(0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)作用24h后,JAK1的磷酸化水平均有不同程度上调,且JAK1磷酸化水平的上调程度与IL-6浓度呈正相关。(2)对STAT3的影响:本研究发现前列腺癌细胞PC-3和DU145经不同浓度IL-6(0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)作用24h后,STAT3的磷酸化水平均有不同程度上调,且STAT3磷酸化水平的上调程度与IL-6浓度呈正相关。(3)对Cyclin D1的影响:本研究发现前列腺癌细胞PC-3和DU145经不同浓度IL-6(0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml)作用 24h 后,Cyclin D1 的翻译水平均有不同程度上调,CyclinD1的上调程度与IL-6浓度呈正相关。[结论]1.IL-6能促进雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3和DU145的增殖。2.雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3和DU145在经不同浓度IL-6作用24h后,上调了 CyclinD1在转录水平的表达,并且CyclinD1上调程度与IL-6浓度呈正相关。3.雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3和DU145在经不同浓度IL-6作用24h后,均上调了 p-JAK1、p-STAT3和CyclinD1在翻译水平的表达,并且p-JAK1、p-STAT3和CyclinD1的上调程度与IL-6浓度呈正相关。4.在IL-6促进前列腺癌细胞增殖的过程中,JAK1/STAT3/CyclinD1可能是参与其中的一条重要调控路径。