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目的:研究低温和离心对小鼠M II卵母细胞纺锤体构象,定位和发育潜力的影响。
方法:实验一,M II期卵母细胞在室温(24℃)或4℃环境下分别处理1、2、4和24h,并于37℃下恢复培养1和2 h,复温或未经复温的卵孤雌激活后分析早期发育潜力,并对处理的卵通过免疫荧光细胞化学技术检测纺锤体的损伤和重建动态。实验二,小鼠MII期卵母细胞经过1000,3000和5000rpm离心10min,通过免疫荧光细胞化学技术检测纺锤体定位的变化,并通过孤雌激活和体外受精分析离心处理的卵母细胞的早期发育潜力。
结果:纺锤体受低温打击的受损程度明显依赖于处理温度和时间,且低温处理对纺锤体的损伤具有较强的可逆性,不论24或4℃,处理时间不超过4h的卵母细胞均能重建正常的纺锤体构像,但孤雌激活胚胎的早期发育潜力仍然受到明显的影响,而24h低温处理导致了纺锤体构像的不可逆破坏。对不同卵龄小鼠卵母细胞的研究发现卵龄大小不影响低温打击后的卵母细胞发育潜力。离心后的卵母细胞纺锤体具有正常的构像和功能,定位于皮层边缘,且更靠近第一极体。离心后的卵母细胞保持了正常的早期发育潜力。
结论:卵母细胞在体外操作时纺锤体构象及其发育潜力受到影响,应该缩短操作时间,而卵母细胞的离心处理可用于改善核移植中的去核程序,提高克隆效率。