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多发性硬化(Multiple Sclerosis,MS)是一种好发于中枢神经系统(central nervous system,CNS)白质的自身神经免疫性脱髓鞘疾疾。MS是青壮年致残率最高的非创伤性神经疾病,早期诊断并长期坚持适当的治疗干预是改善患者长期预后的关键因素。此病预后不良,FDA所认证的药物均只能推迟和缓解发病的严重性但不能彻底治愈MS,因此亟待通过新的途径开发新的药物来更好的缓解MS患者的疾病困扰。MS的病因和发病机制尚未完全阐明,但目前研究倾向于认为,MS是由于遗传和环境因素的复杂作用所导致的自身免疫性疾病,其中CD4+T细胞介导的自身免疫性反应在MS发病中起关键作用。研究发现,TH17细胞能破坏血脑屏障,在体外对神经元细胞具有强烈的细胞毒性作用,将EAE小鼠的TH17细胞移植至正常小鼠可以诱导受体鼠发生炎症性脱髓鞘的病理改变。因此,TH17细胞在MS的病理发生中发挥重要作用,研究其体内分化调控机制,对于深入了解MS的发病机制无疑具有重要意义。Micro RNA作为一种由21-23个碱基组成的非编码RNA,发挥调节细胞分化、细胞周期循环、细胞应激和凋亡等重要作用。目前研究已经发现micro RNA在MS发病中可能发挥重要调节作用,但其相关分子机制远未完全阐明。在类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮组织micro RNA芯片中发现,同对照组相比,自身免疫性疾病患者组织中micro RNA-30a的表达出现下调。这表明micro RNA-30a与自身免疫性疾病的发病具有负向相关性。我们的前期研究也发现,micro RNA-30a过表达慢病毒尾静脉注射可以明显抑制EAE的发病。然而,micro RNA-30a在慢性脱髓鞘疾病中的作用与机制尚待深入研究。本研究采用实验性自身免疫性脑脊髓炎EAE模型,通过Q-PRC、FISH、流式细胞术、免疫印迹和免疫荧光报告系统等研究手段,结合MS患者外周血标本,对micro RNA-30a在TH17细胞分化和慢性脱髓鞘疾病中的表达模式等问题进行了探讨。研究结果如下:1.建立了成熟的TH17细胞体外培养分化模型,利用Q-PCR和流式分析方法发现,过表达micro RNA-30a可以明显抑制TH17分化,而micro RNA-30a的干扰则可以促进TH17细胞分化。2.采用Luciferase报告系统、Q-PCR和免疫印迹等实验手段,发现microRNA-30a可以结合IRF-4的3’UTR区,并且micro RNA-30a也可以在m RNA水平和蛋白水平明显抑制IRF-4的表达。3.以MS患者外周血为样本,研究其CD4+T细胞中micro RNA-30a的表达,发现在疾病进展严重的复发型患者中具有低表达的现象;进一步建立小鼠EAE模型,发现在EAE急性发病期,micro RNA-30a在CD4+T细胞中表达明显下降,且与IL-17a的表达呈现反向相关。采用QPCR研究CD4+T细胞不同亚型中micro RNA30a表达水平发现,micro RNA-30a在TH17细胞中的表达显著减少。4.对640种FDA批准的小分子药物进行了高通量筛选,发现其中75种药物可以明显上调micro RNA-30a表达。其中戒酒硫和苯海拉明对TH17分化的抑制作用最明显。我们将进一步采用EAE模型研究这两种药物对体内炎症性脱髓鞘损伤的作用,筛选以micro RNA30a为靶点,具有能够调节TH17细胞分化和体内炎症性脱髓鞘损伤的药物。我们的研究将为MS的治疗提供新的分子诊断标志、治疗靶点和药物干预手段。