蛋白质的分离纯化是生化分离工程的一个重要组成部分,本文主要研究重组类人胶原蛋白Ⅱ纯化工艺。基因工程菌E·coli BL 21经细胞破碎、沉淀、超滤分离后,再通过离子交换层析纯化,得到较高纯度类人胶原蛋白Ⅱ。 在细胞破碎阶段,通过对细胞破碎方法的选择,系统研究了高压匀浆过程物理和化学因素的影响。包括操作方式、匀浆次数、操作压力、料液悬浮浓度的影响。从而选择采用高压匀浆法批式循环,经2次破碎,操作压力为70MPa、菌体悬浮液浓度为:菌体质量:水体积=1:10。建立破碎率随操作压力变化的方程S=1-(e^{0.058*2-0.005p0.906-1}。 在沉淀阶段,通过单因素实验逐个确定沉淀各条件的范围,采用L₁₆（4⁵）正交表,经方差分析确定沉淀条件为pH2.8,NaCl浓度5%、温度18℃,蛋白浓度5g/L。沉淀后,重组类人胶原蛋白Ⅱ的纯度达到37.68%,回收率达到88.73%。 在超滤阶段,采用截留分子量为30kD的膜包对沉淀后的上清液进行超滤,选择的超滤条件为:压力:0.2MPa、pH=7,料液浓度:0.3%、料液温度:25℃、料液的体积流量:2L/min。并建立了超滤模型:J=ΔP/(0.006871+2.411*v^-4.15*w^<sup>0.78*ΔP^3.848+1.424*v^-1.601*W^0.928*ΔP^3.849。超滤后,重组类人胶原蛋白Ⅱ的纯度达到47.62%,回收率达到91.04%。 在层析阶段,对阴离子（DE52）、阳离子（CM52）交换树脂的分离效果进行比较,采用阳离子（CM52）进行层析分离,NaCl梯度洗脱,得到类人胶原蛋白Ⅱ的纯度为96.43%,总回收率为71.69%。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测分子量为97KD,经考马斯亮蓝染色显红色。