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研究背景:弓形虫是一种专性细胞内寄生的原虫,呈世界性分布,可感染包括人和牲畜在内的所有温血动物,引起人兽共患病的弓形虫病,严重威胁人类健康和畜牧业发展。目前,尚无理想的药物用来防治弓形虫病。因此,深入研究弓形虫的致病机制,寻找新的防治弓形虫病的药物或疫苗显得尤为重要。Exosomes是有核细胞分泌到细胞外环境的膜性小囊泡,直径在30-100 nm之间。其中病原体分泌的exosomes具有一些特殊的生物学功能,如介导病原体与宿主的信息交流、调节宿主免疫应答等。然而,弓形虫是否产生并分泌exosomes尚不清晰。研究目的:从弓形虫RH株和ME 49株的速殖子培养上清液中分别提取并鉴定exosomes,评价弓形虫exosomes对巨噬细胞和BALB/c小鼠的免疫调节作用,为寻找防治弓形虫病的药物或疫苗提供实验依据。研究方法:利用透射电镜和Western blotting分析鉴定从弓形虫速殖子培养液中获取的exosomes形态结构和表面标志。用PKH 67绿色荧光染料对弓形虫分泌的exosomes进行染色后与RAW264.7巨噬细胞共孵育,在荧光显微镜下观察exosomes与巨噬细胞融合情况,采用ELISA法检测弓形虫exosomes影响小鼠巨噬细胞分泌细胞因子水平。将弓形虫exosomes经肌肉注射免疫接种BALB/c小鼠,检测小鼠体内产生的体液免疫与细胞免疫应答来评价其作为抗弓形虫候选疫苗的免疫保护效果。结果:透射电镜和WB检测结果显示,弓形虫exosomes形态结构呈圆形或椭圆形、直径大小在10-150 nm之间、含有蛋白分子P30和Hsp 70。体外实验结果显示,弓形虫exosomes能与巨噬细胞融合,且能调节巨噬细胞分泌细胞因子的水平。弓形虫exosomes免疫接种BALB/c小鼠后能产生更高水平的IFN-γ、IL-12、IgG和IgG2a,小鼠的生存时间也明显延长。体内实验结果显示,弓形虫exosomes诱导小鼠产生一定的体液免疫与细胞免疫,可为抵抗弓形虫速殖子攻击提供部分免疫保护力。结论:弓形虫exosomes与巨噬细胞融合并调节其分泌细胞因子水平,表明巨噬细胞是弓形虫exosomes的靶细胞之一。弓形虫分泌的exosomes作为疫苗可刺激小鼠产生一定的体液免疫和细胞免疫应答,表明弓形虫exosomes也可成为抵抗细胞内病原体的候选疫苗,为研制弓形虫新型疫苗奠定理论基础。