【摘 要】
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目的:观察“调神畅志法”针刺对PD伴发抑郁大鼠的肠道菌群及cAMP/PKA信号通路相关蛋白的影响,探讨“调神畅志法”针刺治疗PD伴发抑郁的可能作用机制。方法:采用6-羟基多巴胺纹状体双靶点注射法结合CUMS法制备PD伴发抑郁大鼠模型,设立正常组、假手术组、模型组、调神畅志组、普通针刺组、西药组,调神畅志组选取“百会透太阳”、“中脘”、“气海”、双侧“神门”、双侧“太冲”、双侧“三阴交”;普通针刺组
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目的:观察“调神畅志法”针刺对PD伴发抑郁大鼠的肠道菌群及cAMP/PKA信号通路相关蛋白的影响,探讨“调神畅志法”针刺治疗PD伴发抑郁的可能作用机制。方法:采用6-羟基多巴胺纹状体双靶点注射法结合CUMS法制备PD伴发抑郁大鼠模型,设立正常组、假手术组、模型组、调神畅志组、普通针刺组、西药组,调神畅志组选取“百会透太阳”、“中脘”、“气海”、双侧“神门”、双侧“太冲”、双侧“三阴交”;普通针刺组选取“舞蹈震颤控制区”、“印堂”、双侧“三阴交”;西药对照组以氟西汀和多巴丝肼片灌胃。采用APO诱导行为学实验、体重测定、旷场实验、蔗糖溶液偏好实验观察各组大鼠行为学情况;16Sr DNA高通量测序观察各种大鼠肠道菌群的组成分布;免疫组织化学法观察大鼠中缝背核内BDNF、肠道组织CCK、VIP蛋白的表达;Elisa法检测中缝背核内cAMP、血清CCK、VIP的含量;Western-blot检测中缝背核内PKA、p-CREB蛋白表达;RT-PCR法检测中缝背核内BDNF mRNA、VIP mRNA的表达。结果:1.行为学测定:西药组、普通针刺组与调神畅志组的大鼠体重增长率、水平运动格数、垂直运动次数、蔗糖溶液偏好率均明显高于模型组（P<0.05）;西药组与调神畅志组的体重增长率、水平运动格数和蔗糖溶液偏好率均明显高于普通针刺组（P<0.05）,西药组与调神畅志组的差异无统计学意义（P>0.05）。2.16Sr DNA高通量测序结果:多样性分析显示,在相同测序深度观察各组大鼠Chao1指数、observed species指数、Shannon指数、Simpson指数,西药组、普通针刺组与调神畅志组的各项指数均高于模型组,其中,调神畅志组的各项指数优于普通针刺组和西药组。分类组成分析显示,在门水平上,正常组、假手术组中肠道微生物拟杆菌占比高于模型组,厚壁菌占比低于模型组;在经过调神畅志组和西药组干预后,拟杆菌占比明显升高,厚壁菌占比降低,分布接近正常组,普通针刺组次之。3.大鼠脑组织cAMP/PKA信号通路相关蛋白的比较:调神畅志组、普通针刺组和西药组大鼠中缝背核内BDNF、cAMP、PKA、p-CREB、BDNF mRNA蛋白表达较模型组明显升高（P<0.05）。调神畅志组中缝背核内BDNF、BDNF mRNA蛋白水平低于西药组（P<0.05）,且高于普通针刺组（P<0.05）。调神畅志与西药组的中缝背核内cAMP含量、PKA、p-CREB蛋白表达量无显著差异（P>0.05）,并且均高于普通针刺组（P<0.05）。4.大鼠肠组织、血清和中缝背核内CCK-8、VIP表达:调神畅志组、普通针刺组和西药组大鼠的肠组织、脑组织及血清中CCK-8、VIP、脑组织VIPmRNA表达水平均高于模型组（P<0.05）。调神畅志组VIP、VIP mRNA蛋白水平低于西药组（P<0.05）,且高于普通针刺组（P<0.05）。调神畅志组与西药组肠组织和血清中VIP含量无明显差异（P>0.05）,且高于普通针刺组（P<0.05）。调神畅志组肠组织、脑组织和血清中CCK-8表达高于西药组和普通针刺组（P<0.05）。结论:1.“调神畅志法”针刺能够明显改善PD伴发抑郁大鼠的体重、水平运动、垂直运动、蔗糖溶液偏好等行为学表现。2.“调神畅志法”针刺干预可以恢复PD伴发抑郁大鼠肠道菌群的多样性、均匀度及拟杆菌、厚壁菌的菌种占比,促使肠道菌群正常分布。3.“调神畅志法”针刺可以提高PD伴发抑郁大鼠中缝背核内cAMP、PKA、pCREB、BDNF等蛋白表达水平,从而对cAMP/PKA信号通路产生影响,发挥抗PD伴发抑郁的作用。4.“调神畅志法”针刺能够提高PD伴发抑郁大鼠肠组织、血清以及脑组织中的脑肠肽CCK-8、VIP表达,激活cAMP/PKA信号通路,调节脑肠互动,从而改善PD伴发抑郁的状态。
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