研究背景及研究目的: 胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，目前其发病机制仍不清楚。 SPHK1(鞘氨醇激酶1)是一种致癌蛋白，在多种肿瘤中高表达，包括前列腺癌、乳腺癌、多形性恶性胶质瘤、小肠腺瘤、急性红白血病和结肠癌等，SPHK1的激活与肿瘤细胞的凋亡、转化、增值和存活密切相关。但是，SPHK1在胃癌发生发展中的功能及分子机制尚不清楚。因此，本研究旨在分析SPHK1在胃癌中的表达及其与临床病理特征及预后的关系，并探讨SPHK1在胃癌中的生物学功能及可能的分子机制。 材料和方法: 在胃活检组织中采用原代培养技术培养正常胃黏膜上皮细胞(HGEC)；用逆转录病毒感染的方法建立稳定高表达SPHK1和SPHK1-RNAi稳定起作用的胃癌细胞株；用RT—PCR和Westernblot检测SPHK1及增殖相关分子的表达；用免疫组化(LSAB)的方法检测胃癌组织和正常的胃组织中SPHK1的表达；用统计学方法分析SPHK1与病理特征及生存预后的关系；用MTT方法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力。 研究结果: 1.SPHK1在胃癌细胞株中高表达胃癌细胞株SGC7901，AGS，MKN45，MKN28，MGC803中SPHK1在转录和翻译水平表达明显高于正常对照HGEC细胞。 2.SPHK1在胃癌组织中高表达在4对胃癌病人组织中，癌组织的SPHK1在转录和翻译水平都比对应的癌旁组织表达高，比值都在2倍以上。 3.SPHK1在胃癌中高表达且与临床分期，T分期和远处转移呈正相关及SPHK1与预后的关系175例胃癌中115例SPHK1呈高表达，强阳性率达65.7％(115/175)，SPHK1的高表达与胃癌的年龄、性别、N分期无显著相关性(P>0.05)，但SPHK1的高表达与胃癌的临床分期、T分期和远处转移情况密切相关(P<0.05)。Kaplan—Meier法分析5年生存曲线，得出SPHK1低表达的胃癌患者5年生存率为39.66％，而SPHK1高表达的胃癌患者5年生存率仅为23.85％，SPHK1低表达组的总体生存率优于SPHK1高表达组，统计学上(Log—Rank检验)有显著性的差异(P<0.05)，而且随着SPHK1表达的增强，总体生存曲线有逐渐下降的趋势。多因素Cox比例风险模型的预后分析中，发现SPHK1和淋巴结转移、远处转移均可作为判断胃癌患者预后生存的独立因素。SPHK1表达强度越高，患者预后生存时间越短。 4.建立稳定的SPHK1外源性高表达及沉默内源性SPHK1的胃癌细胞株用逆转录病毒感染的方法建立稳定外源性高表达SPHK1的胃癌细胞株MGC803/SPHK1和SPHK1-RNAi稳定起作用的胃癌细胞株MGC803/SPHK1-RNAi，嘌呤霉素筛选3天后，连续传代，检测第7代细胞中mRNA和蛋白水平SPHK1的表达量，结果证实稳定细胞株成功建立。 5.SPHK1外源性高表达对MGC803细胞生物学功能的影响与MGC803/Vector对照相比，MTT法和克隆形成实验均显示MGC803/SPHK1的增殖能力明显增强，结果有统计学意义。 6.RNAi沉默内源性SPHK1表达对MGC803细胞生物学功能的影响与MGC803/VectorcontrolRNAi对照相比，MTT法和克隆形成实验均显示MGC803/SPHK1-RNAi的增殖能力明显降低，结果有统计学意义。 7.SPHK1在胃癌增殖中的可能分子机制用RT—PCR和Westernblot检测肿瘤增殖相关的一些信号通路，结果发现SPHK1可以通过激活AKT信号通路影响增殖相关分子的表达，从而调节肿瘤细胞的增殖能力。 结论: 1.SPHK1在胃癌中高表达且与临床分期，T分期和远处转移呈正相关，SPHK1可以作为判断胃癌患者预后生存的独立指标，SPHK1高表达提示预后较差； 2.SPHK1作为一种肿瘤进展基因在胃癌的增殖过程中起着重要作用； 3.SPHK1通过激活AKT信号通路对增殖的相关分子进行调控，进而影响胃癌细胞的增殖能力； 4.SPHK1有可能成为判断胃癌患者进展及预后的一个新分子标志物，为胃癌的预后判断及治疗提供新的分子靶点。