CMO-BADH双价基因植物表达载体构建及转化烟草研究

来源 :辽宁师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:samhsa
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甜菜碱是生物体内普遍存在的一种很有效的渗透调节剂。高等植物中,甜菜碱由胆碱经两步酶催氧化得到,即:胆碱→甜菜碱醛-→甜菜碱,催化第一步反应的酶是胆碱单加氧酶(cholinemonooxygenase,CMO),催化第二步反应的酶是甜菜碱醛脱氢酶(betainealdehydedehydrogenase,BADH)。本实验室已克隆了辽宁碱蓬(SuaedaliaotungensisKitag)CMO和BADH基因,分别构建了其表达载体,进行了烟草转化和转基因烟草的耐盐性研究。本研究就是在前面研究的基础上,构建CMO-BADH双价表达载体,进行烟草转化及转基因烟草耐盐性分析。 在本实验室已构建好的pBI121-CMO和pCAMBIA1301-BADH载体的基础上,经过酶切、连接、转化,获得了含CMO和BADH双价基因的植物表达载体pCAMBIA1301-CMO-BADH。 通过冻融法将带有目的基因的质粒导如根癌农杆菌LBA4404,获得了可以用于植物转化的工程菌LBA4404-pCAMBIA1301-CMO-BADH。 通过叶盘法进行烟草转化,获得了转双价基因的烟草,转基因烟草可以在含2.0%NaCl的培养基上生存。
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