脂质体介导Survivin反义寡核苷酸增强阿霉素诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的研究

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目的:肝癌(hepatocelular carcinoma,HCC),是我国最常见的恶性肿瘤之一恶性程度高、预后差,严重威胁着人类生命与健康。目前,手术切除仍是治疗HCC首选和较有效的方法。化疗是HCC一项重要的辅助治疗手段,但对正常细胞的毒性和肿瘤细胞的耐药性是化疗面临的两大难题。研究表明,Survivin是迄今发现的最强的凋亡抑制因子,并具有抑制细胞凋亡和调节细胞周期双重功能,与肿瘤的化疗耐药性密切相关。本课题利用脂质体介导Survivin反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)研究其增强阿霉素(adriamycin,ADM)诱导肝癌细胞凋亡的作用。方法:通过脂质体转染Survivin ASODN进入肝癌细胞,运用RT-PCR和Western blot检测Survivin的变化,MTT比色法检测细胞的增殖抑制,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测肝癌细胞的凋亡率。用ADM处理后,MTT比色法检测细胞的增殖抑制,FCM检测细胞的凋亡指数的变化。结果:在转染了Survivin的ASODN 24小时后,ASODN Survivin各组均显示mRNA和蛋白的表达下调,以800ng/ml组最为明显,与对照组比较有显著性差异(P<0.05);MTT发现Survivin ASODN处理后各组细胞增殖活性均有不同程度降低;FCM检测发现HepG2细胞在400ng/ml,600ng/ml,800ng/ml组的ASODN在作用24小时后凋亡率可分别为7.45±0.14%,13.15±0.37%,35.75±0.68%,与对照空白组0.54±0.05%和SODN转染组0.56±0.08%比较有显著性差异(P<0.05)。在加用ADM后,600ng/mlASODN组的细胞凋亡率可达41.35±0.68%,与单独使用ADM和转染ASODN后的凋亡率16.94±0.54%和15.07±0.35%比较有显著性差异。而MTT比色实验显示空白对照组与ADM组和ASODN组在转染细胞24小时后,细胞增殖抑制有明显的差异(P<0.05),而ADM+ASODN组与其余三组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:采用脂质体介导转染针对Survivin设计的ASODN,能封闭Survivin基因,下调Survivin蛋白及mRNA的表达,并促进HepG2细胞的凋亡及抑制肝癌细胞生长。ASODN封闭Survivin的表达能加强ADM诱导肝癌细胞凋亡,推测其可增加ADM化疗敏感性,改善常规化疗的效果,有潜在的临床应用价值。
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