论文部分内容阅读
目的：新生儿呼吸窘迫综合征是早产儿的常见病和多发病，病死率和致残率均较高，本病被认为是一种多因素或/和多基因疾病，主要是由于肺脏缺乏肺表面活性物质所致，肺表面活性物质是由磷脂和四种肺表面活性物质蛋白(SP-A、SP-B、SP-C、SP-D)构成的磷脂-蛋白复合物，主要的生理作用是降低肺泡表面张力防止肺泡萎陷，其中SP-B对于维持肺表面活性物质的生理活性至关重要，是PS发挥功能的重要载体，SP-B具有促进磷脂薄膜形成、分布、吸附的作用，因此SP-B的含量和活性的改变可影响肺功能而引起相应的肺疾病。SP-B只有一个基因，定位于2p12→p11.2，SP-B基因具有高度多态性，其增强子、启动子、内含子和编码区域、5’侧翼非翻译区、3’侧翼非翻译区具有多个单核苷酸多态性位点。已有研究证实SP-B基因多态性是引起RDS的重要因素。本研究旨在选择海南汉族早产儿为研究对象，应用病例-队列研究与聚合酶联反应-限制性片段长度多态性技术相结合的分子流行病学方法检测SP-B8714G/C、SP-B1580C/T、SP-B-18A/C三个SNP位点的基因型频率及等位基因分布的情况，从而了解海南汉族人群中肺表面活性物质蛋白B基因分布的特点并探讨肺表面活性物质蛋白B基因单核苷酸多态性与新生儿呼吸窘迫综合征的关系，筛选出RDS的易感基因。从基因水平探讨RDS的发病机理，从而为RDS的防治提供理论依据。
方法：选择88例海南汉族RDS患儿作为研究组，同期在海南省人民医院新生儿科住院无并发症的海南汉族早产儿103例作为对照组，所有研究对象均来源于海南省人民医院2009年7月～2010年10月住院的早产儿。每位研究对象均抽取2ml静脉血置于EDTA管中，选用DNA提取试剂盒提取DNA。应用PCR方法扩增SP-B8714G/C、SP-B1580C/T、SP-B-18A/C三个位点片段，进行酶切后根据限制性片段长度多态性图谱确定基因型，分析基因型频率及等位基因分布的情况，检验三个位点遗传吻合度，分析三个位点与RDS的关系。应用基因计数方法计数出等位基因频率。群体之间等位基因频率的差异及基因型Hardy-Weinberg平衡吻合度采用卡方检验。统计分析采用SPSS11.5软件包。
结果：
1．对比两组的临床资料，我们发现两组间胎龄、性别、出生体重、产前使用激素无显著性差异。
2．对RDS组和对照组患儿的SP-B-(18A/C)、SP-B1580C/T、SP-B8714G/C位点进行Hardy-Weinberg检验提示均符合Hardy-Weinberg平衡，表明各基因频率在海南汉族人群中达到遗传平衡，具有群体代表性。
3.SP-B8714G/C、SP-B1580C/T、SP-B-18A/C位点多态性的分布以及与RDS关系。
(1)-18A/C:RDS组CC、AC、AA基因型分别为36％，52％，12％，A等位基因为37.5％，C等位基因为62.5％，对照组的CC、AC、AA基因型分别为33％，48％，19％。A等位基因为43.2％，C等位基因为56.8％。经x2检验，RDS组和对照组两组人群基因型频率分布无显著差异，两组人群基等位基因频率分布也无显著差异。
(2)1580C/T:RDS组TT、TC、CC基因型分别为5.7％，28.4％，65.9％，T等位基因为19.9％，C等位基因为80.1％，对照组的TT、TC、CC基因型分别为43.7％，46.6％，43.7％。T等位基因为35.9％，C等位基因为64.1％。经x2检验，RDS组和对照组两组人群基因型频率分布有统计学差异，两组人群等位基因频率分布也有显著差异，携带C等位基因的个体患RDS的风险是非携带者的2.26倍OR=2.26，95％CI(1.42～3.60)。
(3)8714G/C:RDS组GG、GC、CC基因型分别为20％，54％，26％，G等位基因为47.2％，C等位基因为52.8％，对照组的GG、GC、CC基因型分别为14％，58％，28％。G等位基因为42.7％，C等位基因为57.3％。经x2检验，RDS组和对照组两组人群基因型频率分布无显著差异，两组人群基因型和等位基因频率分布也无显著差异。
结论：SP-B1580C/T多态性与RDS有关，SP-B1580C/T是RDS的易感基因，携带SP-B1580C等位基因的个体患RDS的风险是非携带者2.26倍。SP-B8714G/C、SP-B-18A/C与RDS无关。