【摘 要】
：
目的:慢性脑缺血（Chronic cerebral ischemia,CCI）是由长期脑血流灌注不足引起的进行性神经变性过程。环状RNA及微小RNA作为非编码RNA,参与调控缺血性脑损伤的具体机制仍不明确。本研究旨在研究以circ＿0000296和miR-141-3p为起点的调控慢性脑缺血的具体机制。研究方法:对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞进行培养。按照通用方法制备构建CCI体外模型。利用C5
【基金项目】
：
国家自然科学基金 （No.81802514, 81571868）； 辽宁省神经肿瘤重点实验室项目（No.112-2400017005）； 辽宁省重点研发计划指导计划 （2019JH8/10300004）； 辽宁省重点研发计划 （2020JH2/10300127）；
论文部分内容阅读
目的:慢性脑缺血（Chronic cerebral ischemia,CCI）是由长期脑血流灌注不足引起的进行性神经变性过程。环状RNA及微小RNA作为非编码RNA,参与调控缺血性脑损伤的具体机制仍不明确。本研究旨在研究以circ＿0000296和miR-141-3p为起点的调控慢性脑缺血的具体机制。研究方法:对小鼠海马神经元细胞系HT22细胞进行培养。按照通用方法制备构建CCI体外模型。利用C57BL/6J小鼠构建CCI在体模型。Real-time PCR实验检测circ＿0000296、miR-194-5p和miR-141-3p在慢性脑缺血组织或细胞中的表达水平。Western blot实验检测Runx3、Sirt1和Wfs1在慢性脑缺血组织或细胞中蛋白的表达水平。运用流式细胞仪检测法检测慢性脑缺血时细胞的凋亡水平。构建circ＿0000296过表达质粒、Runx3过表达质粒、Sirt1过表达质粒、miR-141-3p沉默质粒、Wfs1过表达质粒以及miR-194-5p过表达和沉默质粒。双荧光素酶基因报告系统检测circ＿0000296和miR-194-5p、miR-194-5p和Runx3以及miR-141-3p与Wfs1的靶向结合作用。ChIP实验表明Runx3与Sirt1的启动子区存在结合。在体转染实验检测过表达circ＿0000296后对慢性脑缺血小鼠模型神经元凋亡的影响。结果:circ＿0000296在慢性脑缺血处理的HT22细胞以及海马组织中低表达。过表达circ＿0000296能够显著抑制慢性脑缺血诱导神经元凋亡。miR-194-5p在慢性脑缺血处理的HT22细胞以及海马组织中表达上调,miR-194-5p的过表达可以显著地增强慢性脑缺血诱导的神经元凋亡,沉默miR-194-5p可以显著抑制慢性脑缺血诱导的神经元凋亡。circ＿0000296靶向结合miR-194-5p,过表达circ＿0000296后,miR-194-5p的表达显著降低;过表达miR-194-5p后,circ＿0000296的表达显著降低。circ＿0000296和miR-194-5p同时存在于RNA诱导沉默复合体（RISC）中。Runx3在慢性脑缺血处理的HT22细胞以及海马组织中低表达。miR-194-5p与Runx3 mRNA3’UTR区域具有特异性结合位点,过表达miR-194-5p抑制了Runx3的表达,沉默miR-194-5p促进Runx3的表达。过表达circ＿0000296的同时沉默miR-194-5p显著促进Runx3的表达。过表达Runx3能够显著抑制慢性脑缺血诱导神经元凋亡。Sirt1在慢性脑缺血处理的HT22细胞以及海马组织中低表达。Runx3直接结合Sirt1的启动子区,增强其转录活性。过表达Sirt1显著抑制慢性脑缺血诱导神经元凋亡。过表达circ＿0000296通过结合miR-194-5p,减弱了miR-194-5p对Runx3的负性调控作用,促进了Runx3对Sirt1的转录作用,抑制慢性脑缺血诱导的神经元凋亡。miR-141-3p在慢性脑缺血处理的HT22细胞中高表达。沉默miR-141-3p能够显著抑制慢性脑缺血诱导神经元凋亡。Wfs1在慢性脑缺血处理的HT22细胞中低表达。过表达Wfs1显著抑制慢性脑缺血诱导神经元凋亡。miR-141-3p与Wfs1靶向结合mRNA的3’UTR区。结论:1.在CCI诱导的小鼠海马神经元中,circ＿0000296低表达,Runx3低表达,miR-194-5p高表达。过表达circ＿0000296、过表达Runx3、过表达Sirt1、沉默miR-194-5p均显著抑制慢性脑缺血诱导的神经元凋亡。2.circ＿0000296与miR-194-5p特异性结合调控慢性脑缺血诱导的神经元凋亡。3.Runx3是miR-194-5p的靶基因,抑制慢性脑缺血诱导的神经元凋亡。4.Sirt1与Runx3靶向结合,抑制慢性脑缺血诱导的神经元凋亡。5.miR-194-5p靶向Runx3 3’-UTR调控Sirt1表达水平及慢性脑缺血诱导神经元凋亡。6.mmu＿circ＿0000296通过miR-194-5p/Runx3/Sirt1途径调节慢性脑缺血诱导的鼠神经元凋亡。7.miR-141-3p通过靶向结合Wfs1 mRNA的3’UTR区抑制氧糖剥夺诱导的鼠神经元凋亡。
其他文献
目的:研究不同运动亚型帕金森病患者外周血CCL22水平及其与疾病特点和严重程度的关系,并分析不同亚型帕金森病（Parkinson Disease,PD）患者临床表现差异。方法:收集2019年至2020年就诊于中国医科大学附属盛京医院的32名PD患者,以及年龄性别相匹配的无神经系统疾病的健康对照的临床资料。对PD患者使用统一帕金森病评定量表（UPDRS）、非运动症状评价量表（NMSS）、汉密尔顿抑郁
目的:探讨早期经常规MRI及DWI诊断为局灶性脑白质损伤的早产儿病变特点,观察其近期复查的MRI结局。方法:选取2017年1月至2019年12月于中国医科大学附属盛京医院第一新生儿内科病房住院,早期经常规MRI及DWI诊断为局灶性脑白质损伤的早产儿46例为研究对象,所有患儿均于生后14天内完成首次MRI及DWI检查,且近期（间隔11-68天）于院内完善第2次MRI及DWI检查,按照MRI病灶的形态
目的:缺血性脑卒中已成为世界上第二大致死原因,而在我国脑卒中发生率更是明显高于西方国家。恢复缺血侧脑供血是治疗该疾病的关键因素。而缺血灶的供血恢复会引起诸多不良预后症状,而这些目前尚未有真正有效的解决方式,寻找新的能作用于脑卒中的治疗方法及分子机制是迫切的。近期研究成果揭示迷走神经电刺激（VNS）对预防急性脑缺血再灌注（I/R）大鼠的神经损伤具有作用。本研究拟通过建立大鼠的I/R模型后给予VNS,
目的:探讨我中心DBS对PD患者运动症状,生活质量和人格特征的影响及人格改变与生活质量的关系。方法:1、收取2018年5月至2020年6月,就诊于我院神经内科,依据MDS帕金森病临床诊断标准诊断为临床确诊PD和临床很可能PD,经运动障碍专科医师评定符合帕金森病DBS手术适应症并实施手术的患者。采集患者一般资料:年龄,性别,病程,MMSE,MOCA,BAI,BDI,术前MDS-UPDRSIII开关期
目的:脑卒中是中国居民死亡的主要原因。高血压是脑卒中的主要危险因素。2017年,美国心脏协会（American College of Cardiology and American Heart Association,ACC/AHA）发布了新的高血压指南,该指南将高血压诊断标准由原来的血压≥140/90 mm Hg更改为现在的血压≥130/80 mm Hg。同时该指南将血压在130-139 mm
目的:探讨癫痫共病睡眠障碍儿童血浆中γ-氨基丁酸（GABA）、多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）水平变化及其可能相关的影响因素。方法:选取2019年12月至2020年10月中国医科大学附属盛京医院收治的原发性癫痫患儿60例,应用匹兹堡睡眠质量指数量表（PSQI）评估所有研究对象的睡眠情况,其中癫痫共病睡眠障碍患儿27例,癫痫不伴睡眠障碍患儿33例,另选取健康儿童24例作为对照组。收集癫痫组患儿
目的:探讨重复外周磁刺激（repetitive Peripheral Magnatic Stimulation,rPMS）联合重复经颅磁刺激（repetitive Transcranial Magnatic Stimulation,rTMS）对脑卒中患者上肢运动功能和日常生活能力的改善情况。方法:本研究选取了 2018年11月至2020年10月住院的脑卒中患者共63例,采用随机数表法分为头部治疗组
目的:分析自身免疫性脑炎（AE）的临床特征以及实验室辅助检查结果,进一步探讨自身免疫性脑炎抗体滴度水平和疾病严重程度、短期预后相关性以及影响短期预后的危险因素。研究方法:选择2016年1月至2020年9月我院脑脊液或者血清自身免疫抗体阳性的患者37例进行回顾性研究分析,收集其临床资料以及实验室辅助检查结果,4例未完善腰穿,1例抗体为抗CASPR2抗体,最终纳入32例（15例抗NMDAR抗体,9例抗
目的:对比使用包含拉莫三嗪（Lamotrigine LTG）及左乙拉西坦（levetiracetam LEV）的单药或多药治疗方案控制妊娠期女性癫痫发作时,药物清除率、血药浓度、服药剂量的变化特点及对癫痫发作的控制效果,以指导女性妊娠期癫痫的合理治疗。方法:收集2014年1月至2020年12月就诊于盛京医院癫痫门诊的患者中治疗妊娠期癫痫的65例连续性病例资料,分析其使用抗癫痫药物（Antiepil
目的:神经前体细胞表达发育下调基因4（Nedd4-2）,编码泛素连接酶E3。近期研究发现,部分癫痫患者中Nedd4-2基因发生突变,并指出Nedd4-2通过介导AMPA受体的亚基Glu A1的泛素化,影响神经元的活动和癫痫发作易感性。近年来研究表明,癫痫的发生与离子通道、神经递质、突触连接等有着密切联系。泛素化修饰的底物中有很多是影响中枢神经兴奋性的离子通道蛋白,泛素化修饰通过调控这些通道蛋白表达