使用16SrRNA高通量测序分析慢性鼻窦炎鼻腔菌群分布

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目的:通过鼻腔灌洗液16SrRNA高通量测序,对慢性鼻窦炎鼻腔菌群情况调查分析,比较不同临床表型之间鼻腔微生物学的特点,为慢性鼻窦炎的微生物学研究提供参考信息。方法:自2019年9月至2019年11月期间,在南昌大学第二附属医院接受鼻内镜手术的的慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)患者36例,其中慢性鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)患者21例、慢性鼻窦炎不伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP)患者15例;根据组织中嗜酸性粒细胞(eosinophils,EOS)浸润情况分为嗜酸性粒细胞性慢性鼻窦炎(eosinophil chronic rhinosinusitis ECRS)12例,非嗜酸性粒细胞性慢性鼻窦炎(non eosinophil chronic rhinosinusitis NonECRS)24例。14例鼻中隔偏曲患者(对照组)纳入研究。采集鼻腔灌洗液,使用Illumina高通量测序技术(Illumina Miseq测序平台)对样本中所有细菌的16SrRNA V3-V4可变区进行测序。将测序结果进行操作分类单元(Operational Taxonomic Unit,OTU)聚类后运用生物信息学分析(α多样性分析、β多样性分析、LEfSe分析)与统计学处理分析CRS组与对照组(非CRS)及不同表型CRS鼻腔菌群特征及差异。结果:测序分析结果表明CRS和非CRS患者鼻腔都有丰富多样的细菌类群。生物信息学分析显示,在门的水平上,位于前五的是变形杆菌门、拟杆菌门、厚壁菌门、放线菌门、梭杆菌门;在科的水平上,位于前五的是棒杆菌科、毛螺菌科、Ruminococcaceae、普雷沃氏菌科、Muribaculaceae,在属的水平上,位于前五的是棒杆菌属、拟杆菌属、奈瑟氏球菌属、嗜血菌属、消化链球菌属。CRS组和对照组(非CRS)比较α多样性升高,但α多样性相关性指标(chao 1指数、observed指数、PD指数和shannon指数)均无统计学差异(P>0.05);加权和非加权的PCoA分析显示两组在β多样性上无明显差异(P>0.05);CRS组的鼻腔菌群中丝状杆菌门相对丰度更高,肠杆菌目、肠杆菌科、鞘氨醇单胞菌科、消化链球菌Propionibacteriales、类诺卡氏菌科、Acidobacteriia、类诺卡氏菌属相对丰度更大。而对照组(非CRS)鼻腔菌群中葡萄球菌科、葡萄球菌属、Ambiguous-Taxa相对丰度更大。CRSwNP组和CRSsNP组相比α多样性无明显差异;加权和非加权的PCoA分析表明两组在β多样性上无明显差异(P>0.05);CRSwNP组患者鼻腔菌群中莫拉氏菌属、螺杆菌属、Idiomarina、不动杆菌属、伯克霍尔德氏菌属、乳杆菌属、Vibrionales、真杆菌属、罗斯伯里氏菌属、Anaerostipes相对丰度更高,CRSsNP患者鼻腔菌群高温放线菌属、Luteibacter相对丰度更高。与NonECRS组比较,ECRS组α多样性明显上升,α多样性相关性指标Shannon指数值(P=0.041<0.05)有统计学差异;加权和非加权的PCoA分析表明两组在β多样性上无明显差异(P>0.05),ECRS组患者鼻腔菌群主要集中在厚壁菌门-毛螺菌科和厚壁菌门-梭菌科,梭菌属、Muribaculaceae、螺杆菌属、Erysipelotrichia、Clostridia、真杆菌属相对丰度较高。结论:鼻腔存在丰富多样的细菌类群;不同临床表型CRS细菌群落不同。
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