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根据已发表的猪白细胞介素-2受体γ链基因(porcine interlukin-2 receptorγchain)序列(Genbank登陆号:NM 214083)设计合成特异性引物,以ConA诱导的荣昌猪外周血淋巴细胞总RNA为模板,用一步RT-PCR方法扩增出约1100bp的目的片段。将目的片断克隆到pMD18-T simple载体上,酶切鉴定及序列测定结果表明为IL-2Rγ基因。该基因包括猪IL-2Rγ基因全部开放阅读框1107个碱基,编码368个氨基酸。将所获得的荣昌猪IL-2Rγ基因与其他已在NCBI刊载的猪IL-2Rγ基因序列进行核苷酸序列比较,同源性都在99%以上。所扩增的荣昌猪白细胞介素-2受体γ链基因序列在Genbank登陆号是EU026383。参考荣昌猪IL-2Rγ基因序列,设计特异性引物,以重组质粒pMD18-T-R-IL-2Rγ为模板,将荣昌猪IL-2Rγ不含有信号肽编码序列的IL-2Rγ基因(IL-2Rγ_m),亚克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达质粒pET-32a(+)-R-IL-2Rγ_m。转化大肠杆菌BL21,1mmol/L IPTG诱导表达4小时后,经SDS-PAGE电泳鉴定和Western-Blotting分析,原核表达质粒pET-32a(+)-R-IL-2Rγ_m表达的目的融合蛋白大小为59Kd,占细菌总蛋白的41.8%。另将完整的ORF区(IL-2Rγ)基因插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-R-IL-2Rγ。转化大肠杆菌DH5α,经双酶切、质粒PCR鉴定后,大量提取质粒并纯化后分三次对小鼠进行免疫,流式细胞仪检测免疫小鼠T细胞亚群数量的变化,说明IL-2Rγ具有一定的促免疫细胞增殖反应活性。本试验利用RT-PCR技术在国内首次克隆出荣昌猪的IL-2受体γ链基因,构建了荣昌猪IL-2Rγ成熟蛋白的原核表达系统,实现了荣昌猪IL-2Rγ重组成熟蛋白的高效表达。构建真核表达载体并大量提取和纯化质粒,通过免疫小鼠初步测定其生物学活性,为进一步研究IL-2Rγ的结构、生物学活性及其作用机制提供了理论基础。