目的:提取牙周膜干细胞及牙周膜干细胞来源的外泌体,研究牙周膜干细胞来源的外泌体于体外对细胞增殖和成骨分化的影响,并探究牙周膜干细胞外泌体复合水凝胶在大鼠体内对牙槽骨缺损修复的影响。方法:通过细胞原代培养的方式获取牙周膜干细胞并通过流式细胞术以及诱导分化实验对细胞进行鉴定。使用超速离心的方法获取牙周膜干细胞外泌体,并通过Western blot、透射电镜以及q Nano纳米粒子分析系统对外泌体进行鉴定与表征。用Di D荧光染料标记牙周膜干细胞外泌体,并通过激光扫描共聚焦显微镜观察骨髓间充质干细胞对牙周膜干细胞外泌体的摄取情况。采用CCK-8试剂盒、ALP染色探究牙周膜干细胞外泌体对骨髓间充质干细胞增殖以及成骨分化的影响。制备明胶-海藻酸钠水凝胶,随后通过扫描电子显微镜对其结构进行观察,并提取浸提液进一步检测其细胞毒性。构建外泌体水凝胶复合体,使用Di D荧光染料标记外泌体,并通过激光扫描共聚焦显微镜观察外泌体在水凝胶中的分布。建立大鼠牙槽骨缺损模型,实验中大鼠随机分为三组,分别为空白对照组、无外泌体水凝胶组和外泌体复合水凝胶组,各组分别在缺损处植入相应的材料。通过Micro CT、HE染色和Masson染色观察分析大鼠牙槽骨缺损处的新生骨情况。结果:流式细胞术以及干细胞成骨成脂分化实验的结果显示该实验成功提取了牙周膜干细胞。应用超速离心法成功提取了牙周膜干细胞外泌体,并对其进行了表征。通过激光扫描共聚焦显微镜观察到牙周膜干细胞外泌体能够被骨髓间充质干细胞摄取。CCK-8结果表明与对照组相比,10μg/ml、20μg/ml浓度的牙周膜干细胞外泌体可促进骨髓间充质干细胞增殖;外泌体浓度越高,促进细胞增殖能力越强。ALP染色结果表明,牙周膜干细胞外泌体加成骨诱导基处理的骨髓间充质干细胞的ALP染色明显强于未加外泌体的成骨诱导基组和完全培养基组。体外成功制备明胶-海藻酸钠水凝胶,细胞毒性实验结果表明与对照组相比,水凝胶组的细胞存活率没有显著差异。成功制备外泌体水凝胶复合体,激光扫描共聚焦显微镜观察到Di D荧光染料标记的牙周膜干细胞外泌体分散于水凝胶中。大鼠体内实验中,影像学与组织学分析结果均表明与空白对照组和无外泌体水凝胶组相比,外泌体复合水凝胶组的大鼠牙槽骨缺损处表现出更多的新骨形成。结论:成功提取牙周膜干细胞及牙周膜干细胞来源的外泌体,牙周膜干细胞外泌体能够在体外促进细胞增殖以及成骨分化,牙周膜干细胞外泌体复合水凝胶能够在大鼠体内促进牙槽骨缺损修复。