论文部分内容阅读
背景肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是我国发病率最高的恶性肿瘤之一,HCC发病不典型,进展迅速,手术切除后复发转移率高,预后较差。近年来,尽管以手术切除为主的综合治疗改善了 HCC患者的预后,但是HCC患者五年总体生存率仍不足30%。因此针对肝癌HCC的发生发展、复发转移开展分子机制研究,有望发现新的治疗靶点和肿瘤标记物,为HCC的诊疗提供新思路。长链非编码RNA(Long non-coding RNA,LncRNA),是一种长度超过200个核苷酸的非编码RNA,在以往的研究中被认为是DNA转录过程中无效的RNA“噪音”。但是近年来的研究发现LncRNA参与了细胞增殖、分化、上皮-间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)等过程,对肿瘤细胞的生物学行为发挥了重要调控作用。NKILA(NF-kappaB interacting LncRNA)是近年来我国学者首次发现并报道的一种全新的 LncRNA,通过影响 NF-KappaB(Nuclear factor Kappa-B)通路中IKB(NF-KappaB inhibitor)的磷酸化水平,在乳腺癌、非小细胞肺癌等癌症的转移中起重要调控作用。目前在肝癌中NKILA鲜有报道,其对肝癌的作用与影响有待发掘。方法收集146例病理证实为HCC临床病人的癌组织标本及其对应癌旁组织提取RNA,通过qRT-PCR验证HCC在肝癌组织与癌旁组织NKILA表达有差异。在多个肝癌细胞系与正常永生化肝细胞系中提取RNA,通过qRT-PCR验证肝癌细胞系与正常永生化肝细胞系之间NKILA表达有差异。设计慢病毒载体并构建稳定过表达NKILA肝癌细胞系,使用Transwell试验观察NKILA表达量改变后肝癌细胞在体外的侵袭、迁移能力改变。运用蛋白印迹技术验证NF-kappaB通路与EMT相关蛋白的改变。通过裸鼠尾静脉注射肝癌细胞构建肺转移模型,观察NKILA表达量改变后肝癌细胞在体内的侵袭、迁移能力改变。结果1.qRT-PCR证实了相比于癌旁组织与正常肝细胞系,NKILA在肝癌组织与肝癌细胞系内显著下调(P<0.05)。2.使用SMMC-7721细胞系进行体外实验,NKILA过表达组侵袭、迁移能力明显低于对照组。与此同时,NF-KappaB通路中IKB磷酸化水平减少,EMT相关蛋白如MMP家族,SLUG,vimentin表达显著下调。3.使用SMMC-7721细胞系进行体裸鼠体内实验,NKILA过表达组的肝癌细胞肺转移较对照组明显下降。结论NKILA在肝癌的癌组织中明显低表达,NKILA通过调节NF-KappaB通路,影响EMT的改变,调节肝癌细胞侵袭、迁移能力。过表达NKILA,肝癌细胞侵袭、迁移能力明显降低。NKILA有望成为肝细胞肝癌临床辅助诊断和靶向治疗的生物标志物。