目的:口腔癌是常见的恶性肿瘤,居全身恶性肿瘤的第六位(排在肺癌、胃癌、乳腺癌、直肠癌及子宫颈癌之后),近年来其发病率有逐年增高的趋势,每年新发病例超过50万,而我国则属于口腔癌的高发区。由于口腔癌的发病部位特殊,涉及美观和重要的生理功能,因此对机体和心理的影响不容忽视。尽管目前的医学技术水平已有了长足的进步,但口腔癌的治疗目前仍是以手术为主,并辅以局部放疗和全身化疗的综合治疗,且综合治疗对临床Ⅲ、Ⅳ期患者是提高疗效的有效途径之一。在目前综合治疗的基础之上,研究针对口腔癌患者的免疫治疗具有深远的现实意义。T细胞是机体免疫的主要细胞,在机体抗肿瘤免疫中起重要作用,依据其细胞表面分子标志物的不同分为不同的亚群,在抗肿瘤免疫中分别起到不同的作用,如CD4+T细胞、CD8+T细胞。这些表型不同的细胞群体,可进一步分为不同的亚类,不同亚类的T淋巴细胞在抗肿瘤免疫中既可起到抗肿瘤的作用,又可起到抑制抗肿瘤的作用。T细胞在抗肿瘤免疫中除直接杀伤肿瘤细胞外,还通过分泌不同类型的细胞因子如INF-γ、IL-2、IL-4等对抗肿瘤起免疫调节作用,维持机体免疫的平衡。本研究应用单克隆抗体技术及流式细胞术,研究了口腔癌患者在手术前后、紫杉醇加顺铂化疗前后外周血中T淋巴细胞亚群及细胞内Th1型细胞因子的变化,分析临床治疗对口腔癌患者T淋巴细胞分布及功能的改变,为口腔癌的免疫治疗提供理论依据。方法:各取新鲜静脉血100μl,分别加入FITC标记的CD3单克隆抗体,FITC标记的CD4单克隆抗体,PE标记的CD8单克隆抗体及PE标记的CD56单克隆抗体各10μl,PE标记的INF-γ单克隆抗体10μl、FITC标记的CD4单克隆抗体与PE标记的INF-γ单克隆抗体各10μl、PE标记的IL-2单克隆抗体10μl、FITC标记的CD4单克隆抗体与PE标记的INF-γ单克隆抗体各10μl,在室温下避光孵育1小时,向其内加入红细胞裂解液,裂解红细胞5分钟,加入PBS液洗去血红蛋白,并重新悬浮于1mlPBS中,以流式细胞仪检测T淋巴细胞各表型占淋巴细胞总量的百分比和T淋巴细胞细胞内INF-γ+及IL-2~+T淋巴细胞所占的百分比及CD4~+、INF-γ~+和CD4~+、IL-2~+T淋巴细胞所占的比例,并计算CD4~+T细胞/CD8~+T细胞的比值。结果:手术一周后测定口腔癌病人外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD56~+T淋巴细胞所占比例分别为62.75±8.20%, 42.77±6.33%,25.55±5.45%, 15.78±8.84% ,CD4~+/CD8~+比值范围为1.60±0.42;CD3的表达仍低于对照组(P﹤0.05),与术前比较虽然数据显示有小范围的提高,但经统计二者间差别无统计学意义(P﹥0.05),CD4的表达低于正常对照组,但与术前比较,提升幅度较大(P﹤0.05),CD8的表达明显低于术前状态,与正常对照组的差别已无显著性,CD4/CD8比值比术前有了回升,尽管其值仍未恢复至健康对照者水平(P﹤0.05),CD56的表达对照组比较无明显变化,但与手术前比较却有着显著的下降(P﹤0.05)。经紫杉醇加顺铂化疗20日后再次采集病人外周血测定外周血内各淋巴细胞表型,发现口腔癌病人外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD56~+T淋巴细胞所占比例分别为64.13±10.38% , 38.44±10.88% , 26.35±7.06% , 16.77±8.02% ,CD4~+/CD8~+比值范围为1.52±0.48;CD3~+T淋巴细胞的表达与手术组病人相似,仍低于对照组(P﹤0.05),而与化疗前无明显差别(P﹥0.05),CD4的表达低于对照组,与化疗前相比有了一定的改善,CD8抑制性细胞的比例较化疗前有所下降,恢复至正常水平, CD4/CD8比值有所提高,CD56的表达此时仍无明显变化。手术前后CD4~+/ INF-γ~+、CD4~+/IL-2~+、INF-γ~+、IL-2~+T、CD4~+/INF-γ~+~+INF-γ~+T、CD4~+/IL-2~+~+ IL-2~+T淋巴细胞的比例分别为0.0480±0.0445%、0.1145±0.0725%、0.0765±0.0529%、0.3410±0.1914%、0.4700±0.0234%、0.6500±0.0065%与0.0945±0.0469%、0.2190±0.1320%、0.2680±0.3777%、0.8760±0.8101%、0.5140±0.0339%、0.6500±0.0000%,CD4~+/ INF-γ~+T细胞在手术前后及手术前后与正常对照人群对比均无明显变化(P﹥0.05), CD4~+/IL-2~+、INF-γ~+、IL-2~+、CD4~+/IL-2~++ IL-2~+T淋巴细胞的数量在手术前均低于正常对照组,而在手术后其相对数量则均有所回升。提示在口腔癌患者手术前后存在着细胞因子由Th2向Th1漂移的逆转,从而有利于口腔癌患者免疫功能的恢复。相对于手术组病人,术前化疗组病人Th2性细胞因子的变化则没有手术组明显,其CD4~+/ INF-γ~+、CD4~+/IL-2~+、INF-γ~+、IL-2~+T、CD4~+/INF-γ~++INF-γ~+T、CD4~+/IL-2~++ IL-2~+T淋巴细胞的比例分别为0.0615±0.0594%、0.1630±0.1908%、0.1455±0.1148%、0.4115±0.3711%、0.4200±0.0259%、0.4520±0.0136%与0.0720±0.0658%、0.1720±0.0978%、0.2360±0.2732%、0.4170±0.3752%、0.5400±0.0205%、0.6600±0.1038%,在以上数据中,除INF-γ~+、CD4~+/IL-2~++ IL-2~+ T淋巴细胞与化疗前相比显著提高,有统计学意义外,其余各组数据尽管化疗后较化疗前比例有所提高,但化疗前后各T淋巴细胞比例经统计学分析后并无统计学意义,提示口腔癌病人经紫杉醇加顺铂化疗后尽管存在着细胞因子由Th2向Th1漂移的逆转,但并不明显。结论:1口腔癌病人较正常人存在着免疫抑制现象,其淋巴细胞亚型发生了明显的变化,辅助性T细胞减少,抑制性T细胞含量增加;2手术及紫杉醇加顺铂方案化疗对口腔癌病人免疫状态的改善均有一定的作用,有利于肿瘤患者的治疗。3口腔癌病人Th1细胞因子的分泌能力发生变化,手术、化疗亦使其水平发生相应的改变,其具体的机制及更精确的结果有待进一步研究。