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丁醇是重要的大宗基础化工原料,可由产溶剂梭菌发酵可再生原料生产,并有望成为新一代生物燃料。生物丁醇成本的75%是原料成本,产溶剂梭菌的产物除60-70%为丁醇外,同时存在30-40%的丙酮和乙醇,因此提高溶剂发酵中丁醇比例和糖转化率成为降低成本的关键瓶颈。本项目利用代谢工程的方法中断丙酮丁醇梭菌EA2018 adc的乙酸合成途径,减少乙酸的生成,改变代谢分配,为丙酮丁醇梭菌代谢途径的改造提供指导意义。
L-甲硫氨酸是人体重要的必需氨基酸之一,广泛应用于饲料、食品和医药行业。甲硫氨酸的市场份额基本被日本、欧美等发达国家所占据。我国所需的L-甲硫氨酸主要依赖于进口。工业化生产L-甲硫氨酸的主要方法是化学法和基于化学法的酶催化法,微生物发酵法处于空白阶段。本项目拟利用代谢工程和系统生物学研究方法,对野生型大肠杆菌的细胞代谢网络进行改造,调控和优化,为构建符合产业化要求,具有产业化前景的L-甲硫氨酸生产菌进行基础研究。
本文的主要结论是:
1、敲除丙酮丁醇梭菌EA2018和EA2018adcM的乙酸激酶;
2、乙酸激酶敲除引起EA2018adcM丙酮产生回复;
3、Fe2+离子影响丙酮丁醇梭菌代谢
4、构建了多株中心代谢途径以及L.甲硫氨酸生产途径突变的大肠杆菌