设施农业由于其重茬、连作、病虫害高发等因素,致使农药高频、大量使用,又因其环境相对封闭,使得土壤中农药残留污染问题严重,土壤微生物活性及其多样性受到不利影响。本文选取蔬菜大棚中常用杀菌剂嘧菌酯为研究对象,在室内模拟条件下多次施用嘧菌酯,研究其在土壤中的残留动态及其对土壤呼吸活性、土壤酶活性、土壤微生物多样性的影响,以期为嘧菌酯的土壤生态环境安全性评价和合理使用提供科学依据。主要研究结果如下:1、推荐剂量(2 mg·kg-1)、二倍推荐剂量(4 mg·kg-1)和五倍推荐剂量(10 mg·kg-1)嘧菌酯重复4次施用,其在土壤中降解符合一级动力学规律,2 mg·kg-1处理降解半衰期分别为10.3、9.3、9.8、8.1 d;4 mg·kg-1处理降解半衰期分别为12.0、9.3、7.3、6.3 d;10 mg·kg-1 处理降解半衰期分别为 15.6、9.2、8.5、7.5 d。结果表明,随着施药次数的增加,不同处理嘧菌酯在土壤中降解均呈加快趋势。2、嘧菌酯重复施用4次对土壤脲酶活性无显著影响。对土壤脱氢酶和中性磷酸酶活性在第一次施药后有抑制作用,随后重复施用无显著影响。10 mg·kg-1嘧菌酯处理在第一、二、三、四次施药后14 d,土壤蔗糖酶活性分别增加了 11.9%、7.0%、8.4%、15.3%,而2和4 mg·kg-1嘧菌酯处理对土壤蔗糖酶活性无显著影响。嘧菌酯重复施用三次对土壤过氧化氢酶活性无显著影响,10 mg·kg-1嘧菌酯在第四次施用后14d,土壤过氧化氢酶活性增加了 10.1%。3、采用底物诱导呼吸法测定嘧菌酯对土壤7 h呼吸活性的影响。结果表明,嘧菌酯第一次施用后,土壤呼吸活性显著增加了 10.3%～55.1%,增加量与施用浓度呈正相关;第二次施药后对土壤呼吸活性表现为先促进后恢复;第三次施药对土壤7 h呼吸活性无显著影响;第四次施药7～14 d 土壤呼吸活性增加了4.0%～26.6%。4、采用平板计数法测定嘧菌酯重复施用对土壤可培养微生物数量的影响。嘧菌酯重复施用对土壤真菌数量总体起抑制作用,抑制程度随施药剂量增加而增加。嘧菌酯第一次施用后0d,对可培养真菌数量的抑制率为30～38%,第一、二、三、四次重复施药后14 d,对真菌数量的抑制率分别为33～47%、25～51%、36～48%和29～35%。嘧菌酯第一次施药对土壤细菌数量有显著抑制作用,抑制程度与施药剂量呈正相关,随培养时间增加而逐渐减弱;第二、三次施药后细菌数量呈现先减少后增加,第四次施药促进土壤细菌数量的增加,促进作用随培养时间增加而减弱直至消失。5、采用扩增子(Amplicon)测序的方法研究了嘧菌酯重复施用对土壤微生物群落结构的影响。结果表明嘧菌酯重复施用改变土壤微生物群落结构。嘧菌酯施用后,变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)和放线菌门(Actinobacteria)为土壤中的优势菌门,厚壁菌门(Firmicutes)从劣势菌群转变为优势菌群。通过对chao指数和Shannon指数的分析可知:嘧菌酯第一施用后不同处理土壤细菌的物种丰富度均显著高于后三次;第一次施用后,土壤细菌的物种丰富度无明显变化,第二、三、四次施用后,土壤细菌的丰富度受到显著影响。