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目的 肝富集转录因子是一类具有基因转录调控作用的蛋白质分子，主要存在于肝脏，能与HBV基因组的4个启动子结合，对HBV的基因转录发挥调控作用。其中，核激素受体HNF4和RXR α／PPAR α能支持HBV在非肝源细胞中转录与复制，为HBV前基因组RNA合成和病毒复制所必需，而肝细胞核因子3(HNF3)具有负性调节作用。 为阐明HNF3对HBV的调节机制，本研究通过构建HBV基因组多个HNF3结合位点(包括多聚酶编码区P ORF、PS1p和Sp区HNF3结合位点)突变的复合突变型重组质粒，阻断HNF3 β与这些位点的结合，观察是否会影响HNF3 β对HBV转录和复制的抑制作用，以了解HNF3β抑制HBV复制的作用位点和可能的机理，从而为寻找抗HBV治疗的作用靶点提供理论依据。 方法 1．用带有单个HNF3结合位点突变的突变型HBV重组质粒(分别为含多聚酶编码区P ORF、PS1p区和Sp区HNF3结合位点单个突变的突变型重组质粒即：pHBV4.1PpHNF3mut，pHBV4.1PS1pHNF3mut和pHBV4.1SpHNF3mut)为模板，用限制性内切酶BspE1、Bsm1及Hha1酶切，获取并纯化含多聚酶编码区P ORF、PS1p区和Sp区HNF3结合位点突变的DNA片段，然后进行基因重组，分别构建两个和三个HNF3结合位点复合突变的突变型重组质粒。将质粒DNA转化大肠杆菌内，采