沙漠富油微藻的筛选及其脂代谢相关基因的研究

来源 :石河子大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:boyzhxj
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目的:本研究对古尔班通古特沙漠和塔克拉玛干沙漠中的藻类进行分离纯化和种属分类,收集得到一些沙漠特有的藻类资源;从本实验室已分离的藻种中,筛选出一株可异养微藻,比较该株微藻在不同培养方式不同生长时期其生化组分的含量和变化;构建沙漠微藻混合文库,克隆影响油脂合成代谢的关键基因accD和pepc,为阐明微藻的油脂积累和分子调控机制的关系奠定基础。方法:(1)采集的沙样先进行混合培养(BBM培养基),采用平板法和96孔板逐步稀释法进行藻株的分离纯化,通过形态学与分子生物学相结合的方法进行种属鉴定。(2)分离藻株总脂测定采用酸水解法,脂肪酸组分测定采用GC-MS方法。(3)筛选得到一株可异养藻株GTD8A1,通过分光光度法测定其粗脂含量,考马斯亮兰法测定其粗蛋白含量,气相色谱分析其脂肪酸组分。结果与结论:1.本实验成功分离纯化了11株沙漠微藻,从古尔班通古特沙漠采集沙样中分离了5株,从塔克拉玛干沙漠采集沙样中分离了6株。通过形态学和18S rDNA数据分析,结果显示有10株属于绿藻门,其中5株隶属于衣藻科,1株隶属于原管藻属,2株隶属于小球藻属,1株隶属于克里藻属,另外1株为栅列藻科。其中4株进行了5.8S rDNA-ITS序列分析,TLD2A1和GTD2A2分别与Chlorella sp.和Chlamydomonas debaryana可能为同一物种,TLD7A2和TLD7B-5比对序列差异较大未鉴定到种。16S rDNA数据表明TLD5A1为蓝藻门念珠藻属。2.从10株沙漠绿藻中选出7株微藻样品,测定总脂含量和脂肪酸组分。小球藻TLD6B的总脂含量最高为干重的17.7%,克里藻GTD4b-2的生物量最高(0.346g/L),3株衣藻的总脂含量都偏低其中。6株微藻样品的脂肪酸组分主要含有丰富的C16-C18系脂肪酸,不同样品其脂肪酸成分和含量均有所不同,另外1株为栅列藻TLD7B-5,其富含丰富的长链脂肪酸C20-C24(77.9%)。3.从实验室保存藻种中筛选了1株可异养沙漠微藻GTD8A1。不同培养方式下,以葡萄糖或乙酸钠为外加有机碳源生长能力最好,生物量比自养提高2-4倍。气相色谱分析显示:不同培养条件下均以C16-C18为主;自养时C18:3(n3)含量达总脂肪酸含量的70%左右;兼养和异养培养时,饱和脂肪酸和单不饱和脂肪酸比例增大,C18:3(n3)的比例降低。4.成功构建了9株沙漠微藻cDNA混合文库,文库滴定度:1.0×10~6cfu/ml;库容:2.5×10~6以上;空载率:3.89%;冗余度:12.26%;全长率:51.47%。克隆了影响油脂合成代谢的关键基因pepc和accD的部分片段,为阐明微藻在分子调控机制和油脂积累关系奠定基础。
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