处于干细胞龛（Niche）的造血干细胞（Hematopoietic Stem Cell,HSCs）具有自我更新能力以及多向分化潜能,能维持造血系统的稳定及动态平衡。HSCs常用于临床移植治疗,但不易获取、数量稀少和体外增殖困难等因素限制了这一治疗策。因此,如何有效促进HSCs的体外扩增是有待解决的关键问题。Niche中的基质细胞参与HSCs功能调节,主要途径有Wnt信号转导、Notch配体信号传导、细胞因子分泌等。间充质干细胞（Mesenchyma Stem Cell,MSCs）是经典的龛合细胞,可以为HSCs的体外自我更新和干性维持提供必需的旁分泌因子（生长因子、趋化因子、细胞因子及外泌体等）。慢病毒等基因修饰工具将外源基因转导进MSCs,能进一步提高在体外MSCs对HSCs的增殖影响。NPC1位于细胞内的溶酶体膜上,是转运胆固醇的关键蛋白。课题组前期结果显示,NPC1基因能够促进HSCs的增殖。因此,本文以慢病毒颗粒为载体,将外源NPC1转导进MSCs中并稳定表达,通过Transwell共培养,研究体外NPC1过表达的MSCs对HSCs增殖的影响。主要研究内容与结论如下:（1）慢病毒制备:构建表达NPC1基因的重组质粒,通过第三代慢病毒载体系统制备GFP-NPC1慢病毒以及空载慢病毒,并超滤提纯,分别通过流式检测、q PCR法结合滴度计算公式得出慢病毒感染活性。结果表明,成功制备出两种慢病毒,且均满足10~8TU/m L-10~9TU/m L的浓度范围,具有较强的转染能力,可用于原代细胞的转染。（2）脐带间充质干细胞的分离与鉴定:采用外植体培养法,从脐带碎片中分离出MSCs并传代至p3,分别通过流式检测表面标志物以及分化诱导进行细胞鉴定。结果表明,从人脐带分离出的hu MSCs贴壁生长呈放射状,流式细胞仪检测出高表达CD90（=100%）,而低表达CD45、CD34（<2%）,并成功诱导出成骨与成脂细胞,所得结果满足国际细胞和基因治疗协会所定义的人间充质干细胞的三个最低标准特征。（3）脐带血造血干细胞分离与鉴定:脐带血单个核细胞用密度梯度离心法分离,再用免疫磁珠从单个核细胞分离出CD34+细胞,并鉴定其纯度。结果表明,密度体离心以及免疫磁珠法相结合能够获得高纯度（82.4%）的CD34+细胞。（4）慢病毒转染的MSCs与HSCs非接触Transwell共培养对HSCs细胞增殖、形态影响:具体分组情况为,HSCs组、HSCs+MSCs组、HSCs+GFP-MSCs组、HSCs+NPC1-MSCs组,培养至第五天后收集HSCs样本。经细胞计数（×10~5）与瑞氏-吉姆萨染色结果表明:HSCs+NPC1-MSCs组（1.51±0.1）均高于HSCs组（0.44±0.015）、HSCs+MSCs组（1.04±0.075）、HSCs+GFP-MSCs组（1.06±0.058）,P值均小于0.01,NPC1过表达的MSCs能够显著提高HSCs的体外增殖能力,且四组HSCs形态均无明显变化。