论文部分内容阅读
目的:通过研究甘肃地产菊粉对代谢综合征(MS)大鼠各异常组分、炎症因子、氧化应激及AMPK-ACC/GLUT4信号通路的影响,探讨其对MS的作用及其分子机制,为甘肃地产菊粉防治MS提供理论依据及实验支持。方法:利用高脂高糖高盐饮食诱导联合小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射复制MS大鼠模型。80只7周龄大SPF级雄性Wistar大鼠分成正常饮食组(n=10)和造模组(n=70)。正常组给予普通饲料,造模组给予高脂高糖高盐饲料,于造模开始、第4周、第8周、第12周、第16周时测量各组大鼠的体质量、腹围、体长、空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)、尾动脉收缩压(SBP)及舒张压(DBP)情况。喂养15周后,给予STZ溶液35mg/kg一次性腹腔注射,7天后评价大鼠成模情况,对造模未成功大鼠进行淘汰,模型成功大鼠40只被随机分为4组,即模型组(n=10)、菊粉高计量组(n=10)、菊粉低剂量组(n=10)、罗格列酮组(n=10)。罗格列酮组给予罗格列酮干预;菊粉高、低剂量组予不同剂量的菊粉灌胃;正常组和模型组灌胃双蒸水。每2周测量各组大鼠的血压、FBG及餐后2h血糖(2hPG),8周后检测血脂及FINS,并计算HOMA-IR。ELISA法检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)水平。对肝脏组织进行HE染色,观察病理改变,免疫组化法测定骨骼肌GLUT-4表达,Western bloting(WB)法测定肝脏AMPKɑ2、p-AMPKɑ2、ACCɑ及骨骼肌GLUT4蛋白表达水平;采用RT-PCR检测大鼠肝脏AMPKɑ2、ACCɑmRNA及骨骼肌GLUT-4 m RNA表达情况。结果:1.与正常组大鼠相比,模型组大鼠体质量、腹围、SBP、DBP、FBG、2hPG、FINS、HOMA-IR、TG、TC及LDL-C明显升高,HDL-C降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。以上说明利用高脂高糖高盐饮食饲喂诱导及一次性腹腔注射STZ成功建立了MS大鼠模型,该模型具备MS基本特征。2.药物干预8周后,与模型组相比,菊粉高剂量组大鼠FBG、2hPG、FINS、HOMA-IR、SBP、TG、TC及LDL-C降低,HDL-C升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。3.药物干预8周后,与模型组相比,菊粉高剂量组大鼠IL-6、hs-CRP、MDA水平降低,SOD和GSH-Px水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。4.模型组大鼠出现明显非酒精性脂肪肝(NAFLD)病理改变,菊粉高剂量组大部分肝细胞接近正常形态,脂肪变不明显。5药物干预8周后,免疫组化检测骨骼肌GLUT-4表达提示:与正常组比较,模型组GLUT-4表达显著降低,菊粉高剂量组明显升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。6.药物干预8周后,与正常组比较,模型组肝脏AMPKɑ2、p-AMPKɑ2及骨骼肌GLUT-4表达降低,肝脏ACCɑ表达升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,菊粉高剂量组大鼠肝脏AMPKɑ2、p-AMPKɑ2及骨骼肌GLUT-4表达水平提高,肝脏ACCɑ表达水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.甘肃地产菊粉降低了MS大鼠FBG、2hPG及FINS,改善了胰岛素抵抗(IR),调节了脂质代谢紊乱,有明显的剂量依赖性,以高剂量效果显著。2.甘肃地产菊粉有降低MS大鼠炎症和氧化应激水平的作用。3.甘肃地产菊粉可以减轻MS大鼠脂肪肝病理改变,预防NAFLD的发生。4.甘肃地产菊粉可以上调MS大鼠肝脏AMPKɑ2、p-AMPKɑ2及骨骼肌GLUT-4蛋白和mRNA的表达,降低肝脏ACCɑ蛋白和mRNA的表达,调节能量代谢通路,即AMPK-ACC/GLUT-4信号通路,这可能是甘肃地产菊粉治疗MS的机制之一。