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目的:为准确诊断和评估包虫病流行区犬科动物细粒棘球绦虫感染情况,建立一种快速检测细粒棘球绦虫感染犬粪虫体 DNA的检测方法—环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification. LAMP)。 方法:1)针对细粒棘球绦虫线粒体DNA CO1和ND2基因设计2套LAMP引物;分别用两套引物进行LAMP法与普通 PCR方法的特异性比较,检测细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、犬肠道内常见其它寄生虫(包括犬弓首蛔虫和泡状带绦虫)以及肥胖带绦虫DNA;将含有目的基因片段的质粒作为标准阳性对照,并做10倍梯度稀释进行LAMP法和PCR法敏感性的比较。2)将采集的46份犬粪便标本(采集自四川石渠和巴音布鲁克草原细粒棘球绦虫流行区以及新疆医科大学动物实验中心)提取DNA,分别运用LAMP、PCR和犬尸体剖检进行3种方法感染犬的初步检测评估。3)运用针对CO1基因设计的LAMP引物对8只人工感染犬进行窗口期的初步确定,并与PCR法进行比较。 结果:1)成功设计两套LAMP引物,E.gmtDNA CO1基因的引物,以棘球绦虫DNA(包括细粒棘球绦虫绦虫和多房棘球绦虫)为模板的反应体系出现 LAMP阳性结果,与犬肠道其它寄生虫和肥胖带绦虫为模板的反应体系没有出现 LAMP阴性结果,且该引物的敏感性比普通PCR高出10倍。E.gmtDNA ND2基因的引物能够鉴别多房棘球绦虫,并不与其他检测的寄生虫发生交叉反应,且最低检测限度为4×101拷贝(灵敏度比普通PCR高出103倍)。2)在初步对46份犬粪便DNA检测结果中 ND2引物显示出较好的灵敏度和特异度,χ2检验,该方法与犬尸体剖检/PCR方法的诊断效果无统计学差异。3) CO1 LAMP引物推定8只人工感染犬的窗口期,LAMP法比PCR法提早2d,与PCR法相比,缩短了E.g感染犬的窗口期。 结论:本研究初步建立了LAMP技术检测细粒棘球绦虫感染犬的新方法,在各项特异度、灵敏度和样本检测中展现出较好的研究效果。该方法不需要昂贵的仪器设备和繁琐的电泳分析过程,有望成为流行区和基层兽医站细粒棘球绦虫感染犬检测的新方法。