LAMP检测细粒棘球绦虫感染犬粪虫体DNA的研究

来源 :新疆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kuruby
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:为准确诊断和评估包虫病流行区犬科动物细粒棘球绦虫感染情况,建立一种快速检测细粒棘球绦虫感染犬粪虫体 DNA的检测方法—环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification. LAMP)。  方法:1)针对细粒棘球绦虫线粒体DNA CO1和ND2基因设计2套LAMP引物;分别用两套引物进行LAMP法与普通 PCR方法的特异性比较,检测细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、犬肠道内常见其它寄生虫(包括犬弓首蛔虫和泡状带绦虫)以及肥胖带绦虫DNA;将含有目的基因片段的质粒作为标准阳性对照,并做10倍梯度稀释进行LAMP法和PCR法敏感性的比较。2)将采集的46份犬粪便标本(采集自四川石渠和巴音布鲁克草原细粒棘球绦虫流行区以及新疆医科大学动物实验中心)提取DNA,分别运用LAMP、PCR和犬尸体剖检进行3种方法感染犬的初步检测评估。3)运用针对CO1基因设计的LAMP引物对8只人工感染犬进行窗口期的初步确定,并与PCR法进行比较。  结果:1)成功设计两套LAMP引物,E.gmtDNA CO1基因的引物,以棘球绦虫DNA(包括细粒棘球绦虫绦虫和多房棘球绦虫)为模板的反应体系出现 LAMP阳性结果,与犬肠道其它寄生虫和肥胖带绦虫为模板的反应体系没有出现 LAMP阴性结果,且该引物的敏感性比普通PCR高出10倍。E.gmtDNA ND2基因的引物能够鉴别多房棘球绦虫,并不与其他检测的寄生虫发生交叉反应,且最低检测限度为4×101拷贝(灵敏度比普通PCR高出103倍)。2)在初步对46份犬粪便DNA检测结果中 ND2引物显示出较好的灵敏度和特异度,χ2检验,该方法与犬尸体剖检/PCR方法的诊断效果无统计学差异。3) CO1 LAMP引物推定8只人工感染犬的窗口期,LAMP法比PCR法提早2d,与PCR法相比,缩短了E.g感染犬的窗口期。  结论:本研究初步建立了LAMP技术检测细粒棘球绦虫感染犬的新方法,在各项特异度、灵敏度和样本检测中展现出较好的研究效果。该方法不需要昂贵的仪器设备和繁琐的电泳分析过程,有望成为流行区和基层兽医站细粒棘球绦虫感染犬检测的新方法。
其他文献
《环境工程学》重点向学生讲述水、大气、固体废弃物和噪声污染的成因、基本原理和控制方法,是环境类专业的核心课程之一.根据安徽师范大学环境科学与工程学院十多年课程教学
摘 要:  在对外汉语教学中,近义词的辨析,是一个新手教师在課堂上最怕遇到的问题之一,教师往往难以第一时间找出两组近义词的最大区别而导致无从辨析;也往往解释起来过于冗长而占用太多的课堂时间,导致教学计划无法按时完成。所以,近义词辨析无论是对于对外汉语教学还是对于留学生的词汇学习来说,都是一个不能忽略的难点。本文通过分析留学生近义词使用偏误的具体例句,尝试整理总结近义词辨析的角度和方法,以方便对外汉
孩子在年龄较小的时期,为了一些新奇的事物会做出一些错误的选择和决定,例如会对家长撒谎,孩子说谎固然不对,父母在面对孩子撒谎的过程中显得急促也可以理解.不过,想要让孩子
家庭在学校教育中占有重要的地位.学生的很多问题都是从家庭中带来的,所以为了培养学生的良好行为习惯就要做好家校共育,可从以下几点着手:办好家长学校,打造育人平台;开展家
伴随着市场竞争环境日趋激烈和高校“扩招”政策不断推进,中职学校毕业生的市场就业压力不断增加,给中职学校毕业生就业指导工作带来了严峻挑战.文章围绕中职学校就业指导工