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(1)Clusterin是一种普遍存在的、高度保守的异源二聚体硫酸化糖蛋白,该蛋白广泛表达于机体许多组织中,不仅与多种生物过程相关,而且与多种病理状态有关。最近的全基因组关联分析(Genome-wide association study, GWAS)结果表明Clusterin基因与阿兹海默病的病因学相关。然而,关于Clusterin基因的体内功能以及其在阿兹海默病病理中的作用却了解的很少。尽管人们利用多种哺乳动物细胞系在体外进行了大量关于Clusterin可能的细胞作用研究,但是对于Clusterin蛋白的体内生理功能还不清楚。基因敲除Clusterin的小鼠发育和生存都很正常,Clusterin基因在早期发育中的功能至今还是个未解决的重要问题。在该研究中,我们克隆得到了斑马鱼的Clusterin基因,并且确定了其结构上的保守性、在发育中的表达模式及其生理调控。斑马鱼的Clusterin基因和蛋白与人的直向同源基因Clusterin相似。生化方法测定表明斑马鱼Clusterin属于分泌型蛋白,并且不能与IGFs直接结合。在成年斑马鱼的很多组织中都能检测到Clusterin mRNA的表达。在斑马鱼早期发育中,从12hpf开始检测到Clusterin mRNA的表达,并且其表达水平在此之后逐渐增加。整胚原位杂交分析表明Clusterin mRNA在发育中的间脑脉络丛和中脑脉络丛中特异性地表达。在我们检测的各种胁迫中,热激胁迫能够增加Clusterin mRNA的表达水平,但是缺氧和离子胁迫却不能改变Clusterin mRNA的表达水平。在斑马鱼早期发育中,抑制IGF-1受体介导的信号通路或者过表达IGF配体都不能改变Clusterin mRNA的表达水平。与之对比,特异性地抑制或者基因敲降Notch信号通路后,Clusterin mRNA在脉络丛中的表达水平显著提高。这些结果表明在斑马鱼胚胎和幼体中Clusterin是脉络丛的一个标记基因,并且其在脉络丛中的表达受到Notch信号通路的调控但不受IGF信号通路的调控。(2)类胰岛素生长因子(IGF)信号系统是一个进化上相对保守的信号途径,在多种脊椎动物和细胞系中的研究表明,IGF信号系统在调节骨骼肌的生长、分化和维持成体肌肉组织的动态平衡中起着关键的作用。近年来,虽然人们已经对肌原分化中IGFs的表达和功能展开了较为深入的研究,并且研究表明IGFs具有治疗肌肉相关性疾病(如肌肉萎缩、肌肉营养失调和神经肌肉疾病等)的潜力,但是一直以来缺少外源性IGFs对内源性IGFs表达调控方式及其机制的研究。我们利用肌肉分化模式细胞--C2C12成肌细胞的优势,在该方面进行了研究。首先,我们通过向C2C12细胞中外源性地加入IGF-2蛋白,得出了外源性IGF-2以相反的方式调控内源性IGF-1和IGF-2 mRNA表达的结论:分别降低和提高内源性IGF-1和IGF-2 mRNA的表达水平;并且该调节方式具有时间依赖性。随后通过insulin、IGF-1和IGF-2的剂量反应效应实验我们推测得出IR、IGF-1R和杂合受体都可能参与了该介导作用,并且IR可能起主要作用。进一步通过对其下游相关信号通路进行特异性地抑制以及结合过表达实验的辅助,我们得出多条下游信号途径参与了该过程的结论。