目的研究甲氨蝶呤(MTX)联合烷化剂4-氢过氧环磷酰胺(4HC),对体外培养的干燥综合征(SS)患者外周血单个核细胞(PBMC)周期、凋亡及分泌IL-1β、TNF-α的影响。观察两药联合使用是否具有协同效应,并初步探讨其作用机制,为临床用药提供科学依据。方法MTX、4HC、MTX+4HC三组药物在四个浓度水平(0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml),与体外培养的SS患者PBMC接触48小时。用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)检测细胞周期、凋亡,用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测IL-1β、TNF-α分泌水平。对MTX、4HC在三个浓度(0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)水平进行析因设计,对以上检测指标进行统计分析,观察两药有无协同效应。结果1. MTX可使PBMC的G0/G1期比例增加,S期及G2/M期比例减少,PI%下降。随着药物浓度增加,PBMC凋亡率升高。2. 4HC对细胞周期影响不大,对各期均有杀伤作用,对G0/G1期略为明显。随着药物浓度增加,PBMC凋亡率升高。3. MTX联合4HC可使G0/G1期细胞比例减少,S期及G2/M期比例增加,PI%增加。随着药物浓度增加,PBMC凋亡率升高,高于同一药物浓度水平的单用药组。4.三组随药物浓度的增加,PBMC分泌IL-1β、TNF-α水平均逐渐下降,联合组下降最明显。5. MTX与4HC在改变细胞周期、促进凋亡及降低IL-1β、TNF-α分泌水平方面有交互作用(P<0.05),表现为协同效应。结论细胞周期特异性抑制剂MTX和细胞周期非特异性药物4HC联合具有协同效应。MTX和4HC联合作用于体外培养的SS患者的PBMC,可更有效的使抑制在G0/G1期的细胞凋亡,降低促炎因子IL-1β、TNF-α的分泌水平。