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脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)是脊柱损伤最严重的并发症,导致损伤节段以下运动、感觉功能的缺失。脊髓损伤不仅会给患者本人带来身体和心理的严重伤害,还会对整个社会造成巨大的经济负担。脊髓损伤后的治疗和康复是一个世界性的医学难题,尚无有效的治疗方法。mi RNAs可以通过调控其靶基因参与的信号通路,在神经元损伤后的修复重建、神经干细胞增殖及分化和神经系统发育等方面发挥重要作用。越来越多的证据表明某些mi RNAs在脊髓损伤后异常表达,参与脊髓损伤后的相关病理生理,通过内源性调控mi RNAs来促进脊髓功能恢复可能是治疗SCI的有效策略。目的:探讨mi R-181d-5p对神经细胞轴突生长的调控作用及其分子机制。方法:1、通过动物实验构建小鼠脊髓撞击损伤模型,制作基因报告,在基因报告的结果中筛选出显著差异表达的mi R-181d-5p及PI3K/Akt通路作为本次研究的对象。2、制备mi R-181d-5p过表达慢病毒以及相应对照慢病毒,以PC12细胞为研究对象,利用慢病毒(LV-mi R-181d-5p、LV-sh-GFP)分别感染PC12细胞,建立mi R-181d-5p高表达细胞株(PC12-mi R181d-5p),以高表达sh-GFP空载的细胞(PC12-sh-GFP cells)作为对照;研究过表达mi R-181d-5p对PC12细胞的影响,为进一步探究mi R-181d-5p生物学作用奠定基础;3、通过点突变、双荧光素酶报告基因检测系统证实mi R-181d-5p作用于PTEN m RNA的3′UTR端具体位点;4、细胞免疫荧光观察过表达mi R-181d-5p对PC12细胞轴突的影响;通过RT-PCR、Western blot分别检测PI3K/Akt通路下游基因的变化。结果:1、通过基因芯片报告结果我们发现mi RNAs及相关靶基因m RNAs在脊髓损伤后动态变化,共得到262个显著差异表达的mi RNAs及2973个靶基因,靶基因的显著性功能分析结果发现显著功能共有332项,与之相关的显著性信号转导通路41项,构建了mi RNA调控m RNA关系网络图;2、过表达mi R-181d-5p能特异性地降低PTEN的表达量,上调P-AKT表达,增加轴突相关蛋白(NF-200、GAP-43)、突触相关蛋白(PSD95、Synapsin)的表达量,从而促进PC12细胞轴突伸长。3.并且我们通过双荧光素酶基因报告系统证明mi R-181d-5p能够靶向作用于PTEN m RNA的3′UTR端。结论:1、mi RNA在脊髓损伤后异常表达并且参与脊髓损伤后的病理生理。2、本研究初步证实mi R-181d-5p能够促进PC12细胞轴突伸长,该过程同mi R-181d-5p抑制PTEN表达,激活PI3K/Akt通路有关,能够为mi R-181d-5p治疗神经损伤提供新的思路和策略。