【摘 要】
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该文报道了一株自青岛海域分离的海洋细菌Bacillus sp.H-TP2发酵生产岩藻多糖酶的条件、菌种鉴定、酶的固定化及初步酶学性质研究.该试验首先对H-TP2生产岩藻多糖酶的发酵条
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该文报道了一株自青岛海域分离的海洋细菌Bacillus sp.H-TP2发酵生产岩藻多糖酶的条件、菌种鉴定、酶的固定化及初步酶学性质研究.该试验首先对H-TP2生产岩藻多糖酶的发酵条件进行了研究,结果表明,此菌株在FS培养基上生长良好,最有利于产岩藻多糖酶.其最适生长温度为20℃,培养基起始pH值为7,岩藻多糖酶系诱导酶,最佳碳源是岩藻多糖,最佳氮源为尿素.添加少量的葡萄糖将有助于产酶.在优化培养条件下,菌株生物量和产酶高峰均在24h时达到,表明H-TP2所产岩藻多糖酶系同步合成型酶.试验比较了从海带中提取岩藻多糖的多种方法,从聚合度、得率以及产品成色、质量等方面综合考虑,选定水提、HCL去除褐藻胶等步骤的方法作为提取该试验用岩藻多糖的最终方法.通过提取H-TP2总DNA,以16S rDNA通用引物克隆菌株的16S rDNA,纯化后测序,然后在基因库中进行比对,并结合部分生理生化试验,最终鉴定H-TP2属于Bacillus种属.试验还对粗酶进行了初步的酶学性质和固定化研究.结果表明,粗酶最适反应温度是50℃,最适反应pH值为6.5.固定化方面的试验数据表明,最佳固定化条件为1g壳聚糖同0.04克酶粉作用3h后,加入0.4％的戊二醛,交联3h后,抽滤、洗涤、干燥后的酶活力最高.试验比较了硫酸铵一次性沉淀、硫酸铵分级沉淀和有机溶剂沉淀等不同方法对提取粗酶的影响,发现硫酸铵分级沉淀和有机溶剂沉淀得到的酶活相对较高,其中有机溶剂沉淀操作须在低温下快速进行.对H-TP2发酵生产的岩藻多糖酶进行了凝胶层析、PAGE电泳等方法的纯化,得到了具有较高岩藻多糖酶活性的纯酶组分,其最适反应温度为50℃,最适反应pH值为5.9.
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