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目的:通过CRISPR/Cas9技术敲除自闭症风险基因katnal2,建立稳定的katnal2基因突变的斑马鱼模型,通过斑马鱼突变模型研究katnal2基因对发育的影响。方法:通过整胚原位杂交实验及qPCR实验观察斑马鱼katnal2基因在早期发育阶段的时空表达谱。通过斑马鱼的katnal2基因信息,设计合适的靶位点,制备相应的gRNA和有效的Cas9 m RNA。采用斑马鱼胚胎显微注射技术将gRNA和Cas9 m RNA的混合体系注射入单细胞胚胎卵黄中,48hpf后通过T7E1酶切及Sanger测序检测gRNA的打靶有效性。使用Sanger测序筛选出F1代斑马鱼突变体,采用genotyping-PCR反应筛选F2代纯合突变体,并通过qPCR实验检测katnal2基因敲除后的表达情况。在显微镜下观察野生型及F3代斑马鱼纯合突变体胚胎的早期发育状态并在5dpf时测量其幼鱼的体长进行比较分析,再对6dpf的幼鱼进行明暗刺激实验。结果:qPCR和原位杂交结果显示katnal2在早期发育阶段表达量低,24 hpf之前全身表达,24 hpf之后主要在脑部表达。T7E1酶切和Sanger测序的结果显示位于6号外显子的gRNA1能使斑马鱼katnal2基因发生突变。在F1代的多种突变类型中,通过读码框分析筛选出预测可使katnal2蛋白翻译提前终止的突变类型Mu-1和Mu-2。F3代的qPCR实验表明两种纯合突变体的katnal2基因的表达量明显降低,并观察到这两种纯合突变体胚胎出现下包和集中延伸运动缺陷以及体长减短的表型,且明暗刺激实验显示两组突变体都出现神经行为异常。结论:相对于以往基于细胞水平对katnal2的研究,本研究利用CRISPR/Cas9技术敲除katnal2基因,建立了稳定的katnal2基因突变的斑马鱼模型,为研究katnal2对个体早期发育的影响提供了新的策略。Katnal2基因纯合突变的斑马鱼在早期形态发生阶段出现下包和集中延伸运动缺陷的表型,说明katnal2基因在斑马鱼早期发育阶段发挥重要作用。