第一部分UHRF1在食管鳞癌中的作用及机制研究背景及目的:食管鳞状细胞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）约占中国食管癌病例的90%,但由于早期诊断和治疗的方法有限,患者的5年生存率不足10%。泛素样含PHD和环指域1（ubiquitin-like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1）在DNA甲基化中起着重要作用,并且UHRF1的高表达与多种癌症的不良预后显著相关,但尚未见UHRF1在食管癌中作用的相关报道。本课题旨在研究UHRF1在食管鳞癌中的表达及其在食管鳞癌发生发展中的作用和分子机制。方法:采用免疫组化染色检测UHRF1在食管鳞癌和正常食管上皮组织中的表达,并分析UHRF1表达与临床病理特征的相关性,回顾性分析其预后评估价值。此外,利用慢病毒转染构建UHRF1稳定敲降的食管鳞癌细胞株。通过一系列体内体外实验检测UHRF1在DNA甲基化、细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和DNA损伤应答中的作用,并探讨其分子机制。结果:UHRF1在食管鳞癌组织中高表达,是食管鳞癌患者的独立预后危险因素。在食管鳞癌细胞中,UHRF1敲降引起全基因组DNA低甲基化,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。此外,UHRF1敲降引起DNA损伤应答途径的激活和Wee1的磷酸化,导致细胞周期停滞在G2/M期。裸鼠皮下移植瘤结果提示UHRF1敲降可抑制食管鳞癌的体内增殖。结论:UHRF1是食管鳞癌患者潜在的预后判断标志物和治疗靶标。第二部分TRIB2在食管鳞癌中的作用及机制研究背景及目的:肿瘤干细胞是具有自我更新能力和分化潜能,能产生异质性肿瘤细胞的细胞群体,是肿瘤发生、转移、耐药和复发的根源。目前有关食管癌干细胞特征、调控及其与肿瘤发生发展的关系尚不清楚。Tribbles同源蛋白2（tribbles homologue 2,TRIB2）是真核细胞重要的丝氨酸/苏氨酸假激酶,在脂蛋白代谢、免疫功能、细胞分化和增殖中发挥重要作用。本课题旨在研究食管鳞癌干细胞的分离、基因表达谱特征及TRIB2在食管鳞癌中的调控作用。方法:采用细胞球形成实验富集食管癌干细胞,并通过q RT-PCR检测其干细胞标记表达水平,鉴定其干细胞特性。然后,利用转录组测序分析食管癌干细胞与食管癌细胞的差异表达基因,筛选后得到表达差异显著的潜在干性调控基因（TRIB2）。通过慢病毒转染构建TRIB2稳定敲降的食管癌细胞株,分别采用细胞球形成实验、CCK8和克隆形成实验、PI染色和Transwell实验检测TRIB2敲降对食管癌细胞的自我更新能力、细胞增殖、细胞周期和迁移的影响。通过q RTPCR和Western blot等实验研究TRIB2的分子作用机制。结果:细胞球形成实验富集得到的食管癌细胞高表达干细胞标记,具备肿瘤干细胞特性。TRIB2在食管鳞癌组织及食管癌细胞中高表达,而在食管癌干细胞中的表达水平显著高于食管癌细胞。TRIB2敲降显著抑制食管癌细胞的自我更新能力和迁移能力,诱导细胞发生G0/G1期阻滞进而抑制细胞增殖。TRIB2敲降下调p-Smad2及SOX2蛋白的表达。结论:TRIB2是调控食管癌干细胞特性的重要基因,其作用可能是通过影响SOX2表达而实现。