新型功能化磷酸蛋白富集材料合成与性能研究

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蛋白质在生命活动中起着重要的作用,并且它是生命现象的直接体现者,在医学中研究生理或病理的机制也都是建立在蛋白质水平上的。与此同时,各种形式和行为活动的蛋白质,如翻译后修饰、蛋白质之间的相互作用以及表现形式都需要我们对蛋白质进行进一步研究。大多数的蛋白质在翻译后在不同的基团会发生不同的修饰,例如磷酸化修饰。蛋白质的选择性和可逆性磷酸化修饰在生命活动的调节机制过程中起到了比较重要的作用,体内中30-50%的蛋白质都有可能受到可逆性磷酸化修饰。在近些年,生物质谱已经取代一些传统的手段作为研究磷酸化的分析技术,但是由于磷酸化蛋白的多样性、磷酸化位点自然存在时间短以及相对较低的丰度使得磷酸化位点很难检测到,因此开发一种更加有效分离和富集磷酸化蛋白质的方法是十分有必要的。本文是通过Stober法合成了单分散的二氧化硅微球,并通过衍生实验在二氧化硅微球上嫁接双键以形成二氧化硅材料的载体。另外,本实验又合成了阴离子受体名为1-(3,5-二三氟甲基-苯基)-3-(4-乙烯基苯基)脲的功能单体,并在交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺以及引发剂引发作用下在二氧化硅载体表面修饰了一层聚合物,合成了一种能够对磷酸化蛋白质特异性吸附的新型硅球材料。通过傅里叶红外光谱、透射电子显微镜对新型硅球材料SiO2@M2进行表征,结果显示新型硅球材料的直径大约为210-220nm,其表面修饰有功能单体的聚合物层的厚度约为10nm。然后以经典的磷酸化蛋白质p-酪蛋白为模式蛋白来考察新型硅球材料SiO2@M2对于磷酸化蛋白质的吸附性能。研究结果表明,新型硅球材料SiO2@M2不仅对于p-酪蛋白这一种磷酸化蛋白质具有较高吸附容量(对p-酪蛋白的吸附容量为92mg/g),而且对于其它两种磷酸化蛋白质α-酪蛋白和鸡卵白蛋白OVA均具有良好的吸附容量(对α-酪蛋白的吸附容量为40.2mg/g、对鸡卵白蛋白OVA的吸附容量为36.3mg/g),均高于其它非磷酸化蛋白质的吸附容量(牛血清蛋白BSA的吸附容量为12.8mg/g、细胞色素C的吸附容量为6.28mg/g、牛血红蛋白的吸附容量为3.8mg/g、溶菌酶的吸附容量为8.08mg/g)。通过SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳技术可以反映出新型硅球材料SiO2@M2对于磷酸化蛋白质具有良好的选择性,能够从多元蛋白体系中选择性富集磷酸化蛋白质,并且通过实际样品—脱脂牛奶中磷酸化蛋白质的选择性富集,实验结果表明,新型硅球材料SiO2@M2对于样品中的磷酸化蛋白质也具有较好的选择性富集作用。
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