研究背景 缺氧诱导因子-1（hypoxia-inducible factor-1，HIF-1）是缺氧条件下产生的一种重要的转录因子，其诱导表达的基因与能量代谢、细胞周期阻滞、细胞生存与增殖、血管新生、血管舒缩、红细胞生成、肿瘤生长，转移以及肿瘤多药耐药等相关。多数肿瘤具有缺氧的微环境，在肿瘤形成过程中一个关键的步骤是对缺氧的适应，HIF-1就在这个过程中发挥了重要的作用。HIF-1广泛存在于动物及人体的多种肿瘤细胞中，其活性对维持肿瘤细胞的能量代谢，血管新生，促进肿瘤增殖和转移起到重要作用，因此成为肿瘤治疗的重要靶点。新近发展起来的RNA干扰技术能够高效特异地沉默靶基因的表达，成为基因治疗的重要工具。目的 研究靶向针对缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的短发夹RNA（shRNA）对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞功能的影响。方法 通过在细胞培养中加入150μmol／L氯化钴（CoCl₂）模拟低氧环境。采用RNA干扰技术，构建靶向针对HIF-1α的shRNA真核表达载体，利用脂质体lipofactamine 2000将shRNA真核表达载体转染入MCF-7细胞中，经G418（400μg／ml）筛选得到抗性克隆。MCF-7细胞经150μmol／L的CoCl₂处理24小时后，通过Real-time PCR和Western blot分别检测HIF-1α的mRNA和蛋白水平的变化。Annexin V／PI荧光标记检测细胞经150μmol／L的CoCl₂处理24小时后MCF-7细胞凋亡的