本文主要围绕灰树花杂交亲本的筛选、供试菌株间亲缘关系的分析、灰树花孢子萌发条件的摸索、灰树花交配型分析以及灰树花杂交子的鉴定和筛选等内容展开,以期获得一些适合工厂化栽培的优势杂交子,同时为以后的灰树花杂交育种提供一些借鉴。具体的研究内容和结论如下:1.采用工厂化栽培模式进行两轮出菇比较,从40个灰树花供试菌株中筛选杂交亲本菌株,第一轮在21.5℃～23.5℃相对较高的出菇温度下,筛选获得两个出菇温度高、生产周期短,工厂化栽培目标性状突出的的菌株Gr0001+3和Gr0017。菌株Gr0001+3的各项农艺性状总体上优于Gr0017,所以菌株Gr0001+3更适合作为灰树花工厂化栽培菌株杂交育种的核心亲本。第二轮在16.0℃～18.0℃相对较低的出菇温度下,筛选获得14个菌株,其中菌株Gr0005、Gr0007、Gr0008、Gr0013、Gr0016、Gr0022、Gr0024、Gr0026、Gr0027 等 9 个菌株在产量、开片,综合农艺性状均有一个或多个与Gr0001+3互补的目标性状表现突出,可作为与核心亲本组配杂交的候选亲本。2.利用RAPD、ISSR两种分子标记对40个灰树花菌株进行聚类分析。发现高温开片的菌株Gr0001+3和Gr0017的亲缘关系较其他菌株要近,在RAPD标记中,当相异系数D=0.65左右时,菌株Gr0001+3和Gr0017被归为同一类;在ISSR标记中,在相异系数D=0.56左右时,菌株Gr0001+3和Gr0017被归为同一类;在RAPD-ISSR综合分析中,在相异系数为D=0.52左右时,菌株Gr0001+3和Gr0017也被归为同一类。同时从候选亲本菌株中筛选出与Gr0001+3遗传距离较远,组配杂交有望获得更高杂种优势的亲本菌株7个,确定为Gr0005、Gr0008、Gr0013、Gr0016、Gr0022、Gr0024、Gr0026。3.通过孢子萌发主要条件优化试验,结果表明:孢子在0.6 M甘露醇渗透压稳定剂中预先用2.0%溶壁酶酶解处理6 h,然后移入液体马铃薯麦麸培养基中28℃温度下培养的萌发率最高。4.首先通过常规的核迁移试验对菌株Gr0001+3和Gr0017的交配型进行鉴定,结果表明:灰树花为四极性异宗结合菌类,Gr0001+3的4类交配型T1、T2、T3及T4分别为A1B1、A2B2、A2B1和A1B2,Gr0017 t1、t2、t3及t4的交配型分别为AxBx、AyBy、AyBx和AxBy（x≠y,但x、y具体是1、2或3、4……n有待于和Gr0001+3的4类交配型进一步两两配对研究后才能确定）。为了简化交配型鉴定工作,本研究同步开展了 OWE-SOJ技术在灰树花交配型鉴定上的验证研究,结果表明:鉴定结果与核迁移试验鉴定结果不一致,或无法明确鉴定出交配型,OWE-SOJ技术不适合作为灰树花交配型鉴定的简便方法。5.以Gr0001+3为核心菌株,分别同7个筛选获得的候选亲本菌株Gr0005、Gr0008、Gr0013、Gr0016、Gr0022、Gr0024、Gr0026 进行单-单杂交配对,通过以同根菌丝上有多个锁状联合为指标进行镜检筛选,共获得104个杂交子;通过杂交子与双亲菌株的菌丝生长速度和拮抗试验筛选到35个生长速度超越双亲的杂交子;并对这些杂交子进行了遗传距离分析,结果表明:有37.14%（13个）的杂交子遗传距离与Gr0001+3更近,传承了更多核心菌株的遗传物质;同时还选用RAPD和ISSR两种分子标记对这些杂交子进行了 DNA分子水平鉴定,结果表明:鉴定对象均兼具有双亲的特异性条带,从而验证了鉴定对象确为真正的杂交后代,同时也证明了本研究杂交育种方法的正确性和可行性。