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目的:传统的核酸扩增(nucleic acid amplification,NAA)技术检测结核分枝杆菌(Mycobacterial tuberculosis,MTB),因其简单快捷、灵敏度高被临床上大量使用,但该技术检测结果假阳性率高的缺陷,是其应用于结核病临床检验诊断的重大挑战。本研究首次利用结核分枝杆菌散在分布单元——数目可变串联重复基因序列(mycobacterial interspersed repetitive unit–variable number of tandem repeat,MIRU-VNTR)的分布特点,采用PCR技术直接对痰液样本进行基因扩增,以检测痰液标本MTB并进行相关质量控制,通过特异度、灵敏度等指标的临床性能评价,为该方法在临床的进一步推广应用奠定实验基础。方法:根据扩增条件及临床检测实际需要,优化选择VNTR位点MTUB21,MTUB04,QUB-18,QUB-26,QUB-11b,MIRU31,MIRU10和MIRU26作为检测靶标,建立可直接用于临床痰液标本检测的方法,收集130例肺MTB患者和200例非结核患者(其它肺部疾病)的临床痰液样本,分别用MIRU-VNTR法和荧光定量PCR(FQ-PCR)法对上述样本进行检测,两种检测方法结果与罗氏培养法、临床诊断进行比较分析。结果:以罗氏培养法为金标准时,MIRU-VNTR法的灵敏度为93.1%(108/116),特异度为97.7%(209/214),FQ-PCR法的灵敏度为94.0%(109/116),特异度为96.7%(207/214),MIRU-VNTR法和FQ-PCR法检测结果无统计学差异(χ2=0.352,P=0.569﹥0.05)。以临床诊断为金标准时,MIRU-VNTR法的灵敏度为86.9%(113/130),特异度为100%(200/200),FQ-PCR法的灵敏度为87.7%(114/130),特异度为99.0%(198/200),MIRU-VNTR法和FQ-PCR法检测结果无统计学差异(χ2=0.030,P=0.862﹥0.05),但MIRU-VNTR法未发现假阳性结果。在MIRU-VNTR法检测为阳性的结果中,98.2%(111/113)的样本分子编码互不相同,只有1.8%(2/113)分子编码一致(皆为5-4-6-8-5-5-3-8),对此2例编码一致的样本,经过重复检测,结果表明此2例病人的确携带MTB,并非由于交叉污染所致。结论:与传统FQ-PCR方法比较,MIRU-VNTR检测方法灵敏度、特异度均无显著差异,MIRU-VNTR法的优势在于,通过赋予每例样本特定的指纹信息,使不同样本的阳性结果能区分开来,很好控制检测结果的假阳性率。本研究表明MIRU-VNTR可用于临床MTB的诊断,初步显示有较好的临床诊断价值。