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帕金森病（parkinson disease，PD）是一种常见的神经退行性疾病，严重威胁了中老年人的生命健康。黑质致密部多巴胺（dopamine，DA）能神经元凋亡是PD的主要特征，目前PD病因尚不明确，临床上也无有效治愈手段。有研究表明小胶质细胞活化介导的神经炎症与PD的病程进展有关，雌激素替代疗法在治疗PD中显示出了良好的前景。鸡豆黄素A（biochanin A，Bioch A)是一种异黄酮类植物雌激素，可以与雌激素受体（estrogen receptors，ERs）结合发挥类雌激素样作用，我们先前研究表明Bioch A可以抑制小胶质细胞的激活，但对于它在PD等神经退行性疾病的作用尚不明确。 目的：研究Bioch A能否通过ERs抑制LPS诱导的BV2细胞激活模型及其对MPP+诱导的PC12细胞凋亡模型是否具有保护作用。 方法： 1.将常规培养的BV2细胞分成7组：（1）Control组；（2）LPS（10μg/ml）组；（3）Bioch A(5μM)组；（4）Bioch A(5μM)+ICI（0.1μM）组；（5）ER(0.1μM）组；（6）ER(0.1μM）+ICI（0.1μM）组，(7)ICI组（0.1μM）组。分别加入以上药物预处理2h，除Control组外其余各组均加入LPS（10μg/ml）共同孵育36h。采用Griess法检测上清液中的一氧化氮（nitric oxide，NO)含量；采用DCFH-DA探针法测量细胞内的活性氧（reactive oxygen species，ROS）的含量；采用ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素-1β（interleukin1β，IL-1β）和前列腺素E2（prostaglandin，PGE2）的含量；采用蛋白免疫印迹法（western blot）分别检测了尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化酶（NADPH oxidase)的亚基P47phox和gp91phox，一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS)，NF-κB和p-NF-κB，以及增设了MAPK通路特异性抑制剂组PD098059（0.02μM，ERK抑制剂)、SP600125（0.01μM，JNK抑制剂）、SB203580（0.02μM，P38抑制剂）的p-ERK、p-JNK和p-P38的蛋白表达。 2.用MTT法检测MPP+对PC12细胞的凋亡毒性作用和Bioch A的合适药物浓度，筛选出MPP+诱导细胞凋亡的剂量和Bioch A的应用剂量。将常规培养的PC12细胞分成6组。（1）Control组；（2）MPP+（1μM）组；（3）Bioch A（1.25μM）；（4）Bioch A（2.5μM）；（5）Bioch A（5μM）；（6）ER（0.1μM）组。加药预处理2h后，除Control组外，其余各组加入MPP+（1μM）共同孵育36h。采用DCFH-DA探针法检测ROS；利用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率；Western blot法检测cleaved Caspase-3以及cleaved Caspase-9表达水平。 结果： 1.与Bioch A组比较，Bioch A+ICI组升高了细胞上清液中NO含量以及细胞内ROS表达水平。表明Bioch A通过雌激素受体降低BV2激活后产生的NO含量和ROS表达。 2.与Bioch A组比较，Bioch A+ICI组升高了TNF-α、IL-1β和PGE2炎性因子的含量，同时上调 iNOS蛋白表达水平。表明 Bioch A通过雌激素受体抑制 BV2激活发挥其抗炎作用。 3.与Bioch A组比较，Bioch A+ICI组上调了NADPH氧化酶的亚基P47phox和gp91phox以及p-NF-κB蛋白表达水平。表明Bioch A通过雌激素受体下调BV2激活后产生的P47phox和gp91phox以及p-NF-κB蛋白表达水平。 4.Bioch A组可以明显降低LPS刺激诱导的p-ERK、p-JNK和p-P38蛋白的表达。与Bioch A组比较，Bioch A+ICI组升高了p-ERK、p-JNK和p-P38蛋白表达水平。表明Bioch A通过雌激素受体抑制BV2激活后产生的MAPK信号通路。 5.与Control组相比，MPP+各剂量组细胞存活率随着剂量的增加而下降，根据细胞存活率选取1nM作为MPP+造模浓度。与Control组相比，Bioch A(10μM)以上剂量组出现了明显的活性抑制，因此我们选择Bioch A（1.25、2.5.、5μM）三个浓度进行实验。 6.MPP+模型组ROS含量较对照组升高明显，Bioch A（2.5，5μM）组减少了PC12细胞内 ROS的含量。 7.与Control组相比，MPP+模型组细胞凋亡率和活化的cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9蛋白表达提高，Bioch A（2.5，5μM）有效降低了细胞凋亡率以及cleaved Caspase-3和cleaved Caspase9蛋白的表达水平。 结论： 1.鸡豆黄素A通过雌激素受体抑制BV2细胞的激活。 2.鸡豆黄素A对MPP+诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。