诸葛菜总黄酮提取、纯化及抗氧化性研究

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诸葛菜[Orychophragmus],别名二月兰,十字花科。它含有蛋白质、糖类、粗纤维、胡萝卜素、及维生素(B、C、P)等,含有Ca、P、K、Mg等矿物元素和Fe、Cu、Zn、Mn等微量元素。最为可贵的是它含有人体所需的八种氨基酸,这是一般蔬菜所“望尘莫及”的,多年来的研究工作主要集中在诸葛菜作为油料、食物资源利用方面,而其植株内具有生物活性的物质成分至今很少报道,诸葛菜中药用有效成分古有记载:“性温、味辛、苦、甘、入胃经”在我国分布广泛,资源丰富,是一种具有很大开发潜力的植物。诸葛菜黄酮的研究还鲜见报道,本文以诸葛菜为研究对象,目的在于探索其未被发现的黄酮及其所具有的生物活性,为进一步开发利用奠定基础。本文主要研究了诸葛菜黄酮的提取工艺、采用微波辅助乙醇浸提法提取诸葛菜中黄酮,通过单因素试验,及对乙醇提取剂浓度、微波功率、微波时间和料液比进行L9(34)正交选择试验,得出最佳提取工艺条件为:料液比1g:10mL,乙醇体积分数70%,微波时间4min,微波功率600W。然后对诸葛菜提取液中黄酮的纯化进行了研究,采用大孔吸附树脂ADS-17为诸葛菜黄酮的专用分离树脂,得出诸葛菜黄酮的最佳精制条件为:采用吸附速度为3mL/min,洗脱流速1.5 mL/min,径高比为1:20,洗脱剂选择60%乙醇溶液,洗脱剂用量为3倍树脂床体积。在此条件下得到的洗脱液再采用真空冷冻干燥的方法,得到诸葛菜黄酮的浅黄色粉末。产品中黄酮纯度达到58%,经ADS-17树脂依次吸附、洗脱后,产品中黄酮纯度变为原来上柱前样液的6.5倍。利用颜色反应检验产品中黄酮类化合物与多种显色试剂阳性反应结果表明,诸葛菜中含黄酮类化合物属于黄酮或黄酮醇类。利用薄层层析定性产品中黄酮类化合物可能属黄酮类,综上所述,可以确定产品中黄酮类化合物可能属黄酮类。最后针对黄酮类化合物有很好的清除自由基和抗氧化能力,能阻止自由基在体内的产生。本试验研究了诸葛菜黄酮对猪油的抗氧化作用,确定其具有较强的抗氧化性,其抗氧化性随着黄酮溶液浓度逐渐增大具有剂量效应关系。且对由Fenton体系产生的羟基自由基有一定的清除作用,随着诸葛菜总黄酮提取液浓度的增加,对羟基自由基的清除能力也增强,说明当黄酮类物质的浓度增加时,其清除率也增大。
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