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1目的本文采用腰突颗粒含药血清干预人髓核细胞后,通过检测II型胶原、I型胶原、蛋白多糖、炎症因子白介素8、肿瘤坏死因子α及NF-κB信号通路中p-P65、P50、IΚB-α、IKK-β等关键蛋白表达量的变化,来探讨腰突颗粒治疗腰椎间盘突出症的作用机制。2方法将8只新西兰大白兔随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、生理盐水组,每组2只。各组灌服腰突颗粒煎剂,剂量分别为:高剂量组40ml、中剂量组20ml、低剂量组10ml。生理盐水组灌服10ml生理盐水。连续灌胃7天,于最后一次灌胃2h后颈总动脉采血,制备含药血清。取术中人髓核细胞进行原代培养,通过甲苯胺蓝染色、番红O染色、免疫组化染色鉴定培养人髓核细胞。取第3代髓核细胞进行10%含药血清培养,干预24h后,分别提取各组髓核细胞RNA,反转录,实时荧光定量PCR检测II型胶原、I型胶原、蛋白多糖、IL-8、TNF-α、P50、IΚB-α、IKK-β的表达量,并提取各组细胞蛋白,进行WB检测NF-κB信号通路中p-P65、P50、IΚB-α、IKK-β蛋白的表达变化,观察腰突颗粒对其表达的影响。3结果3.1人髓核的原代培养及鉴定原代人髓核细胞贴壁后多为圆形或梭形,胞浆充足,胞核清晰。传代后,细胞逐渐呈多角形,细胞核大,核仁多为2-3个。甲苯胺蓝染色细胞呈天蓝色,番红O染色细胞呈红色,II型胶原免疫组化染色,胞浆呈黄褐色,细胞核呈蓝色。3.2含药血清干预后人髓核细胞中II型胶原、I型胶原、蛋白多糖的表达与生理盐水组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组II型胶原、蛋白多糖相对表达量均增高,I型胶原相对表达量均降低。且随着灌服腰突颗粒剂量的增加,II型胶原、蛋白多糖表达量逐渐增高,I型胶原相对表达量逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.3含药血清干预后人髓核细胞中IL-8、TNF-α的表达与生理盐水组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组IL-8、TNF-α相对表达量均降低,且随着灌服腰突颗粒剂量的增加,表达量逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。3.4含药血清干预后人髓核细胞中p-P65、P50、IΚB-α、IKK-β的表达与生理盐水组相比,低剂量组、中剂量组、高剂量组p-P65、P50、IΚB-α、IKK-β相对表达量均降低,且随着灌服腰突颗粒剂量的增加,表达量逐渐降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。4结论4.1腰突颗粒含药血清对人髓核细胞的影响4.1.1腰突颗粒含药血清增高II型胶原及蛋白多糖的表达,降低I型胶原的表达;4.1.2腰突颗粒含药血清降低IL-8、TNF-α的表达,降低炎性因子的表达;4.1.3腰突颗粒含药血清降低P50、p-P65、IΚB-α、IKK-β的表达,抑制NF-κB信号通路的启动;4.2腰突颗粒治疗腰椎间盘突出症的机制4.2.1腰突颗粒能减缓髓核细胞的衰老、髓核组织的退变;4.2.2调节细胞因子,抑制局部炎性反应的启动,增强抗炎效应;4.2.3抑制NF-κB信号通路的激活,降低椎间盘局部炎症反应。