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本论文运用分支系统学方法研究了马六甲肉食螨在肉食螨亚科中的系统地位,并使用ISSR分子标记对马六甲肉食螨的居群遗传多样性进行评估,分析和探讨了其居群遗传结构和基因流动。主要研究内容和结果有以下两个方面:1马六甲肉食螨的系统地位基于形态特征的肉食螨亚科和肉食螨属支序分析表明:马六甲肉食螨隶属的肉食螨属最先从肉食螨亚科中分离出来,独立形成一支,是该亚科中最原始的类群;根据支序分析所构建的肉食螨属的两种支序图-Mp树和Nj树的拓扑结构几乎一致,仅施氏肉食螨的地位较难确定。最早分化出来的是特氏肉食螨和吐昔肉食螨,马六甲肉食螨则是肉食螨属最进化的种之一,并与强壮肉食螨以高置信度形成姐妹群,两者的亲缘关系最近。
2马六甲肉食螨居群遗传多样性分析(1)ISSR-PCR反应体系优化:通过正交实验方法,建立了ISSR-PCR最佳扩增体系-10×PCRbuffer2.5μL、MgCl22μL、TaqDNA聚合酶0.1μL、dNTPs0.5μL、引物1μL、模板4μL、ddH2O14.9μL。
(2)ISSR-PCR扩增结果:实验共筛选出13条带型清晰、稳定性好、多态性高的引物,分别对广东广州(GD)、安徽巢湖(AH)、江苏泰州(JS)及江西南昌(NC)、九江(JJ)5个居群进行ISSR-PCR扩增,产生71条带,其中65条为多念性条带,多念性条带百分比(PPB)达到91.55%。
(3)遗传多样性分析:多态性条带百分比PPB、Shannon多样性指数I及期望杂合度He对居群遗传多样的评价结果相一致:遗传多样性由高到低为NC>GD>JJ>JS>AH,NC居群遗传多样性最丰富,AH遗传多样性丰富度最低。在物种水平上,观察等位基因数Na=1.9155±0.2801,有效等位基因数Ne=1.5515±0.3402,PPB、I和He的值分别是91.55%、0.3203、0.4783。
(4)居群遗传结构和基因流:居群间的遗传分化系数Gst=0.4021,说明大部分的遗传多样性分布在居群内,与AMOVA分析结果一致。Neis无偏遗传距离UPMGA聚类分析显示5个居群的关系可表示为(NCGD)(JJ(JSAH)),即南昌和广州两个居群亲缘关系近,安徽巢湖和江苏泰州及江西九江3个居群亲缘关系较近,马六甲肉食螨在南昌和九江之间发生了较强的居群分化。遗传结构分析表明5个地理居群间的基因流水平低(Nm=0.3717),Mantel检验显示遗传距离和地理距离之间相关性不显著(r=0.3720,P<0.001),说明居群间的基因交流不受地理距离的限制。