【摘 要】
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目的观察右美托咪定（Dexmedetomidine,DEX）对高糖诱导SH-SY5Y/APP695（Swedish mutant APP transfected SH-SYSY,SAS）细胞损伤的保护作用并探究其机制。方法1建立SAS细胞高糖损伤模型:通过对SAS细胞不同时间和不同糖浓度培养,采用CCK-8法测定细胞活性,选取适宜浓度和处理时间,建立高糖损伤模型。利用不同浓度DEX处理高糖损伤SA
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目的观察右美托咪定（Dexmedetomidine,DEX）对高糖诱导SH-SY5Y/APP695（Swedish mutant APP transfected SH-SYSY,SAS）细胞损伤的保护作用并探究其机制。方法1建立SAS细胞高糖损伤模型:通过对SAS细胞不同时间和不同糖浓度培养,采用CCK-8法测定细胞活性,选取适宜浓度和处理时间,建立高糖损伤模型。利用不同浓度DEX处理高糖损伤SAS细胞模型,探究DEX对高糖损伤的最佳保护浓度2为明确DEX对高糖损伤SAS细胞的保护作用,将SAS细胞分为对照组（Control）、单纯DEX组（DEX）、单纯高糖组（HG）、高糖+DEX组（HG+DEX）。应用CCK-8法检测细胞活性,显微镜下观察SAS细胞形态改变,TUNEL/DAPI荧光染色和流式细胞术测定细胞凋亡率。3为探究DEX对高糖培养SAS细胞自噬水平的影响以及相应细胞活性改变,将SAS细胞分为7组:对照组（Control）、高糖组（HG）、高糖+DEX组（HG+DEX）、高糖+雷帕霉素组（HG+RAPA）、高糖+DEX组+RAPA组（HG+DEX+RAPA）、高糖+3-MA组（HG+3-MA）、高糖+DEX+3-MA组（HG+DEX+3-MA）。应用CCK-8法检测细胞活性,显微镜下观察SAS细胞形态改变,TUNEL/DAPI荧光染色和流式细胞术测定细胞凋亡比率,MDC染色检测自噬活性,Western blot技术检测自噬蛋白p62、Beclin-1、LC3II/LC3I表达4为研究DEX对高糖环境中SAS细胞自噬的调控机制,将SAS细胞分为对照组（Control）、单纯DEX组（DEX）、单纯高糖组（HG）、高糖+DEX组（HG+DEX）,采用Western blot技术检测p-AMPK、AMPK、p-m TOR、m TOR的相对表达量。5为进一步探索DEX对高糖损伤SAS细胞的自噬调控通路,将细胞分成对照组（Control）、高糖组（HG）、高糖+DEX组（HG+DEX）、高糖+DEX+AMPK抑制剂CC组（HG+DEX+CC）。应用CCK-8法检测细胞活性,显微镜下观察细胞形态改变,TUNEL/DAPI荧光染色和流式细胞术测定细胞凋亡率,MDC染色检测自噬活性,Western blot技术检测自噬蛋白p62、Beclin-1、LC3II/LC3I和凋亡相关蛋白Caspase 3、BAX、Bcl-2表达。结果1 DEX减轻高糖引起的SAS细胞损伤1)高糖对SAS细胞的损伤呈现时间和剂量依赖性;2)DEX提高高糖损伤SAS细胞的活性,减少凋亡。2 DEX通过上调自噬水平减轻高糖诱导的SAS细胞损伤1)高糖引起SAS细胞自噬水平下降2)DEX上调高糖损伤SAS细胞内的自噬水平,效果与RAPA近似,可被3-MA拮抗3)高糖损伤SAS细胞模型中,自噬活性影响细胞活性,具有一致性3 DEX通过AMPK/m TOR通路调控高糖环境中SAS细胞自噬1)高糖抑制SAS细胞内AMPK/m TOR通路2)DEX激活高糖处理SAS细胞内AMPK/m TOR通路,提高自噬水平结论DEX通过AMPK/m TOR通路上调细胞内自噬水平,进而改善高糖诱导的SAS细胞损伤。
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