目的自身免疫性睾丸炎是由外伤、隐睾、自身免疫性疾病等多种原因引起的非感染性炎症疾病,是引起不育症的重要因素。Klotho（KL）是一种衰老相关蛋白,亦可在多种疾病中调节炎症反应,具有抗炎的作用,但其在自身免疫性睾丸炎中的作用尚不明确。本文旨在利用实验性自身免疫性睾丸炎模型（Experimental autoimmune orchitis,EAO）探究Klotho蛋白在自身免疫性睾丸炎中的作用及机制。方法将10-12周龄雄性野生型（WT）与kl+/kl-基因型（HE）C57BL/6小鼠分为8组:正常组（WT N）、野生型30天模型组（WT EAO 30d）、野生型30天干预组（WT EAO+KL 30d）、野生型50天模型组（WT EAO 50d）、野生型50天干预组（WT EAO+KL 50d）、杂合子未造模组（HE N）、杂合子30天模型组（HE EAO30d）和杂合子50天模型组（HE EAO 50d）。分别于造模第30天、50天将小鼠处死并取材。石蜡切片HE染色观察炎性细胞浸润程度、睾丸形态学的改变、对模型进行评分;免疫组织化学染色（Immunohistochemistry,IHC）检测Klotho蛋白在睾丸中的表达;免疫组织荧光染色（Immunofluorescence,IF）检测Klotho在巨噬细胞（Klotho+F4/80+）中的表达、炎症细胞（F4/80+i NOS+巨噬细胞、F4/80+CD206+巨噬细胞、CD4+IL-17+T细胞）分布与变化;体外培养腹腔巨噬细胞,分为3组:N组、LPS组、LPS+KL组,检测上清液中IL-1β的表达。蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测Klotho蛋白及炎症与凋亡相关调节因子、转录因子的表达（Klotho、NLRP3、PI3K、p-AKT 2、AKT 2、caspase 1、STAT 3、caspase 3等）。PCR检测小鼠KL基因的表达。结果经形态学观察WT EAO 30d组、WT EAO 50d组,较WT N组组织内均有大量炎性细胞浸润、生精小管不同程度的损伤,其中WT EAO 50d损伤程度更大。经KL干预,WT EAO+KL 30d组、WT EAO+KL 50d组的炎性浸润程度降低,生精小管损伤较少,与WT EAO 30d组、WT EAO 50d组有差异。CD4+IL-17+T细胞、F4/80+i NOS+巨噬细胞数在EAO组织中显著增加（P<0.05）,经KL干预后数量明显减少（P<0.05）。F4/80+CD206+巨噬细胞在KL处理组显著升高（P>0.05）。p-AKT2、AKT2均有不同程度增加,经KL干预后表达均降低。NLRP3、caspase1、caspase 3与STAT 3在EAO组中均表达增加（P<0.05）,经KL干预后表达量明显减少（P<0.05）。WT、HE、KO组蛋白量递减,在HE造模组F4/80+i NOS+M1型巨噬细胞、CD4+IL-17+T细胞比相同条件下WT小鼠略有增高。HE组睾丸中AKT 2、NLRP3蛋白表达水平比WT组增加。结论Klotho蛋白在EAO中可以抑制炎症细胞浸润,抑制睾丸炎症反应和生殖细胞的凋亡。同时,Klotho通过、NLRP3/caspase 1对EAO起到保护作用;亦可通过AKT 2/caspase 3、STAT 3调控细胞凋亡。