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研究目的:
客观评价视疲劳患者眼部各调节参数的变化；研究目舒丸对视疲劳患者眼部异常调节参数的影响；从信号传导角度,研究目舒丸对兔眼睫状体平滑肌细胞内舒、缩信号的影响,探讨目舒丸改善视疲劳患者调节功能的分子生物学机制,为临床用药提供客观依据和指导,同时也为今后研究中药防治视疲劳提供新的思路和方法。
研究方法:
1.根据正常对照组及视疲劳组患者的纳入及排除标准,选取正常对照组患者21人、视疲劳组患者56人,在综合验光仪上用不同方法测定两组患者以下调节参数:应用负镜片法分别测定单双眼调节幅度；测定负、正相对调节；应用融像性交叉柱镜(FCC)测定调节反应；进行远近距离水平隐斜的测定(并由此计算得到计算性AC/A),以及测定近距离40cm+1.00D和40cm-1.00D的隐斜度(由此得到梯度性AC/A);应用±2.00D的翻转拍测定调节灵敏度。采用SPSS11.0统计软件分别对各组的调节参数进行比较和分析。
2.随机将视疲劳组患者分为两个治疗组,七叶洋地黄双苷组:患者确诊后,眼局部滴用七叶洋地黄双苷眼水,4次/日、1滴/次；目舒丸＋七叶洋地黄双苷组:患者确诊后,眼局部滴用七叶洋地黄双苷眼水,4次/日、1滴/次,并口服目舒丸,2次/日、6g/次。测量两组患者治疗前及治疗后2周,视疲劳中医证侯疗效及积分的变化及异于正常对照组的各调节参数的变化。采用SPSS11.0统计软件分别对各组数据进行比较和分析。
3.采用胶原酶消化法体外培养兔眼睫状体平滑肌细胞；采用激光共聚焦显微镜技术检测目舒丸对兔睫状体平滑肌细胞内Ca2+浓度的影响；采用real-timePCR技术检测目舒丸对兔睫状体平滑肌细胞内RhoA、PKC表达的影响；采用酶联免疫吸附试验技术检测目舒丸对兔睫状体平滑肌细胞内CAMP、NOS表达的影响。
研究结果:
1.正常对照组及视疲劳组患者年龄、性别没有明显差异,差异无统计学意义；与正常对照组相比,视疲劳组患者左右眼单眼调节幅度、双眼调节幅度、正相对调节、相对调节幅度总量、单眼加正镜片至模糊值、计算性AC/A、调节灵活性各值异于正常对照组,且差异有统计学意义；而调节储备、调节反应、梯度性AC/A各值异于正常对照组,但差异未表现出统计学意义。
2.七叶洋地黄双苷组及目舒丸＋七叶洋地黄双苷组治疗后视疲劳中医症状体征积分均较治疗前减少,差别有统计学意义(P<0.01),且目舒丸＋七叶洋地黄双苷组治疗前后证侯积分差值较七叶洋地黄双苷组明显,差别有统计学意义(P<0.01)。
3.七叶洋地黄双苷组及目舒丸＋叶洋地黄双苷组治疗后对视疲劳组患者左右眼单眼调节幅度、双眼调节幅度、正相对调节、相对调节幅度总量、单眼加正镜片至模糊值、计算性AC/A、调节灵活性各值均有提高,差异有统计学意义;在双眼调节幅度、正相对调节、相对调节幅度总量、眼加正镜片至模糊值、调节灵活性各值的治疗前后差值上,目舒丸＋七叶洋地黄双苷组较七叶洋地黄双苷组明显,差异有统计学意义；在单眼调节幅度、计算性AC/A治疗前后的差值上,两组相比差异没有统计学意义。
4.培养的兔睫状体平滑肌细胞免疫细胞化学鉴定:培养的兔睫状体平滑肌细胞为α-actin免疫反应阳性,阳性物质位于胞浆内,呈棕黄色,胞核不着色；倒置显微镜下可见胞核无色,胞浆呈棕黄色。
5.目舒丸在高钙或无钙的条件下可使睫状体平滑肌细胞内Ca2+浓度略下降,但差异均无统计学意义；高钙环境下目舒丸可抑制氯化乙酰胆碱引起的睫状体平滑肌细胞内Ca2+浓度的升高,但差异无统计学意义(P>0.05)；无钙环境下目舒丸可明显抑制氯化乙酰胆碱引起的睫状体平滑肌细胞内Ca2+浓度的升高,差异有统计学意义(P<0.01)。
6.加入氯化乙酰胆碱,兔睫状体平滑肌细胞内RhoA、PKC表达增加；在加入氯化乙酰胆碱前24h加入目舒丸,兔睫状体平滑肌细胞内RhoA、PKC增加值减少,较单纯加入氯化乙酰胆碱差异有统计学意义(P<0.01)。
7.加入目舒丸24h后,睫状体平滑肌细胞内CAMP、NOS表达增加,但与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)；48h后,CAMP表达量较对照组相比明显增加,差异有显著意义(P<0.01)。
研究结论:
1.单用七叶洋地黄双苷眼水及合用七叶洋地黄双苷眼水、目舒丸均可改善视疲劳患者异于正常对照组的眼部各调节参数值,但合用七叶洋地黄双苷眼水、目舒丸对改善视疲劳患者中医证侯及眼部调节功能的作用优于单纯使用七叶洋地黄双苷眼水。
2.目舒丸可通过调节睫状体平滑肌细胞内Ca2+浓度影响睫状体平滑肌钙依赖性收缩；通过调节睫状体平滑肌细胞内RhoA、PKC表达影响睫状体平滑肌非钙依赖性收缩。
3.目舒丸可通过调节睫状体平滑肌细胞内CAMP表达,影响睫状体平滑肌舒张。
4.目舒丸通过调节睫状体平滑肌细胞内舒缩因子的表达,影响睫状体平滑肌舒缩功能,改善视疲劳患者眼部调节功能,改善视疲劳患者眼部症状。