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目的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)属嗜肝DNA病毒，研究显示，肝富集转录因子(Liver-Enriched Transcription Factors，LETFs)在HBV的转录复制中具有重要的调控作用。肝细胞核因子4α(Hepatocyte Nuclear Factor 4α，HNF-4α)和HNF-3β同属于LETFs，体外细胞培养和动物实验研究表明，HNF-4α可以支持HBV在非肝源细胞中的复制，而HNF-3β对HBV复制具抑制作用。然而目前对于HNF-4α和HNF-3β在HBV慢性感染者的肝脏组织中的表达情况及其与HBV复制之间的相互关系尚不十分清楚。本文旨在观察HBV感染者的肝穿刺活检组织中乙肝表面抗原(HBsAg，hepatitis B virus surface antigen)、乙肝核心抗原(HBcAg，hepatitis B virus core antigen)、乙肝病毒DNA(HBVDNA)及HNF-4α和HNF-3β的表达情况，初步探索HBV感染者的肝穿刺活检组织中HNF-4α和HNF-3β的表达与HBV复制水平之间的可能关系。方法收集华西医院感染性疾病中心86例HBV慢性感染者的肝活检组织标本，其中部分组织经切片后裱在同一张载玻片上，制作成组织集成片，其余组织制作成普通的切片。用免疫组织化学染色方法分别检测每个肝活检组织连续切片中HNF-4α、HNF-3β与HBsAg、HBcAg的表达情况；制备Dig标记的HBVDNA探针，用原位杂交法检测肝活检组织连续切片中HBVDNA表达情况。参照Axiotis评分标准，根据阳性细胞占同类细胞总数的百分比以及细胞染色强度两方面进行综合判定。阳性细胞所占同类细胞总数的百分比评分标准：阳性细胞数＜10％为0分，11％～25％为1分，26％～50％为2分，51％～75％为3分，76％～100％为4分；细胞染色强度评分标准：不着色为0分，黄色或蓝色为1分，棕黄色或紫蓝色为2分，黄褐色或蓝黑色为3分。两种评分相加所得的总分值即为最后的评分结果。对所得的结果作Kappa一致性检验、直线相关分析和t检验，所有统计均通过SPSS10.0软件包完成。结果1．86例HBV慢性感染者的肝活检组织中HNF-4α、HNF-3β与HBsAg、HBcAg及HBVDNA的表达情况实验观察到HNF-4α、HNF-3β和HBVDNA的表达呈核和／或浆阳性，HBsAg的表达呈浆阳性，而HBcAg的表达则呈核／浆／膜阳性。根据Axiotis评分标准对上述指标的表达进行评分，所得的分数如表1所示。表1中的分数0～7分，为从染色强度及染色面积两个方面进行评分之后分数的总和，其中2.5分代表评分为2～3分，取均数，以此类推。2．HNF-4α、HNF-3β与HBsAg、HBcAg及HBVDNA表达评分的统计学分析结果经统计学直线相关分析和t检验，86例HBV慢性感染者的肝活检组织中HNF-4α与HBsAg的表达水平之间、HNF-4α与HBcAg的表达水平之间以及HNF-4α与HBVDNA的表达水平之间均具有正相关关系(P＜0.01，R＞0)；而HNF-3β与HBsAg的表达水平之间、HNF-3β与HBcAg的表达水平之间以及HNF-3β与HBVDNA的表达水平之间具有负相关关系(P＜0.01，R＜0)。表2中“r值”为相关系数，取值范围为-1～1。两变量相关的方向用r的正负号表示，即r＞0表示正相关；r＜0表示负相关；r绝对值越接近1，表示两变量相关关系密切程度越高。“v”代表自由度，本实验中v=86-2=84，此时查t界值表，观察P值，P＜0.01，说明有统计学意义，两者间存在相关关系。结论本研究结果显示，在HBV慢性感染者的肝组织中，HNF-4α和HNF-3β的表达与HBV复制水平之间存在相关关系。HNF-4α与HBsAg、HBcAg和HBVDNA的表达水平之间存在正相关关系，而HNF-3β与HBsAg、HBcAg和HBVDNA的表达水平之间存在负相关关系，这提示HNF-4α和HNF-3β可能是体内HBV复制的影响因素之一，HNF-4α可能支持HBV的复制，而HNF-3β可能对HBV复制具有抑制作用。本研究结果为今后深入研究人体中HBV复制的调控机理并用于指导临床实践提供了理论基础。对于HBV复制与HNF-4α和HNF-3β之间的确切作用关系，究竟是何者处于主导地位，尚需进一步深入的研究。