鸡毒支原体是引起鸡慢性呼吸道疾病的一种重要病原菌,感染后免疫力降低,常继发大肠杆菌感染,症状加重,死亡率增加,从而给养禽业带来了巨大的经济损失。由于家禽集约化的养殖方式,当前控制这些疾病的最主要方式是使用抗菌药物。达氟沙星属于人工合成的第三代动物专用喹诺酮类抗菌药,具有抗菌谱广、抗菌活性强、药动学特征优良等特点。前期,已有报道达氟沙星对大肠杆菌半体内PK/PD研究和鸡毒支原体的体内PK/PD研究,但关于达氟沙星对大肠杆菌和鸡毒支原体混合感染在雏鸡体内的PK/PD研究还未见报道。本研究的目的是建立大肠杆菌和鸡毒支原体混合感染雏鸡体内PK/PD模型,测定达氟沙星在雏鸡体内的药动学和药效学参数,通过拟合,确定最佳PK/PD参数,制定推荐给药剂量,为兽医临床用药提供科学依据。1.达氟沙星对大肠杆菌和鸡毒支原体的体外药效学研究采用微量稀释法测定了达氟沙星对大肠杆菌和鸡毒支原体在鸡血清和液体培养基中的最小抑菌浓度(MIC),最小杀菌浓度(MBC)和防突变浓度(MPC)。结果显示,以MH液体培养基为基质,达氟沙星对大肠杆菌的MIC、MBC、MPC为0.008、0.008、0.113 μg/mL;以鸡毒支原体培养基为基质,达氟沙星对鸡毒支原体的MIC、MBC、MPC为0.004、0.016、0.05μg/mL。以鸡血清为基质时,达氟沙星对大肠杆菌和鸡毒支原体的MIC分别为0.016、0.008 μg/mL,MBC分别为0.06、0.031 μg/mL。体外杀菌曲线表明,对于大肠杆菌,当药物浓度小于MIC时,达氟沙星对大肠杆菌有轻微的抑菌作用。但是当达氟沙星浓度为4 MIC时,无论在鸡血清还是在液体培养基中对大肠杆菌均已经达到杀菌效果。对于鸡毒支原体,当达氟沙星的浓度为8 MIC时,才能达到杀菌的效果。2.鸡毒支原体-大肠杆菌感染雏鸡模型的建立本研究通过不同攻毒方式和攻毒剂量以及临床症状、死亡率、病原分离、荧光定量PCR鉴定等评价方式,最终确定的攻毒方案为气囊注射0.4 mL,浓度为108ccu/mL鸡毒支原体一天两次、连续三天,之后在第四天胸肌肌肉注射0.4 mL,浓度为107 cfu/mL大肠杆菌,结果表明,6 h后出现明显的临床症状和病理变化,在血,肝,肺中大肠杆菌的载菌量为103 cfu/mL,106 cfu/g,106 cfu/g,气管、气囊、肺中鸡毒支原体的载菌量为105 ccu/g,能够建立载菌量稳定的雏鸡鸡毒支原体-大肠杆菌混合感染模型,证明该模型可以用于后续试验。3.达氟沙星在鸡毒支原体-大肠杆菌混合感染雏鸡的药动学研究180只8日龄感染雏鸡,随机平均分为3组,分别口服20、10、1 mg/kg b.w.达氟沙星溶液,给药后于0、0.5、1、2、4、6、8、12和24 h分别从颈静脉采血0.5 mL、分离血清,采用高效液相色谱(HPLC)法测定血清中达氟沙星浓度,通过非房室模型拟合,确定达氟沙星在感染雏鸡的药动学参数。结果表明,低中高三种剂量的Cmax分别为:0.077±0.005 μg/mL,0.398±0.019 μg/mL和 0.887±0.049 μg/mL;Tmax分别为:3.458±0.958 h,4.833±0.458 h 和 3.458±0.562 h。T1/2β 分别为:15.987±2.400 h,9.070±1.022 h和10.221±1.406 h。同时将给药剂量和AUC0.24h、Cmax分别做线性拟合,达氟沙星在1～20 mg/kg b.w.剂量范围内,药动学参数AUC0-24h、Cmax与给药剂量呈线性关系。4.达氟沙星对大肠杆菌和鸡毒支原体的体内药效学和PK/PD拟合54只8日龄感染雏鸡,随机分为9组,分别口服20、15、12.5、10、7.5、5、2、1和0 mg/kg b.w.的达氟沙星,每天一次,连续给药3天。最后一次给药24 h后处死雏鸡,测定血液、肝、肺中大肠杆菌的载菌量和气管、气囊、肺中鸡毒支原体的载菌量。最后,利用Sigmoid Emax模型拟合PK/PD参数与抗菌效果之间的相关性。结果表明,体内药效学研究中,随着给药剂量的增加,体内杀菌效果随之增强,达氟沙星AUC0-24 h/MIC参数与体内药物的抗菌效应拟合良好。在血、肝和肺中,当AUC0-24 h/MIC分别为139.62、58.13、86.14时,可以对大肠杆菌产生抑制作用;在肝和肺中,当AUC0-24 h/MIC分别为618.56和623.72时可以对大肠杆菌产生杀菌作用;当AUC0-24h/MIC分别为462.45和2452.18时可以对鸡毒支原体产生抑菌和杀菌效果。以上结果表明:对于达氟沙星治疗大肠杆菌和鸡毒支原体混合感染,达到抑菌和杀菌效果时的AUC0-24 h/MIC值为462.45,2452.18,给药剂量分别是7和38 mg/kg b.w.,一天一次,连续给药三天能够达到抑菌和杀菌的效果。