为了比较国产重组C225与国外已上市同类药Erbitux,是否具有相似或更好的与EGFR竞争结合力、体内外抗肿瘤药效,以及相似的动物体内药代动力学特征。按照一类新生物制品以及“细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究指导原则（讨论稿）”有效性研究的要求,提供国产重组C225药效学和临床前药代动力学资料,阐明体内抗肿瘤机理,为进一步的临床研究提供参考。本研究将从体内外药效学实验和健康食蟹猴体内药代动力学实验两方面进行研究,并与国外已上市药Erbitux相比较。第一部分:国产重组C225抗肿瘤药效学研究选用EGFR不表达的肿瘤细胞（人胃癌BGC-823细胞、人食管癌Eca109细胞、人舌癌KBV-200细胞）和EGFR高表达的肿瘤细胞（人乳腺癌MCF-7细胞、人结肠癌HT-29细胞、人非小细胞肺癌（MSCLC）A549细胞）,用细胞集落法,进行国产C225体外药效学研究,其中EGFR不表达的细胞是确证国产C225抗肿瘤作用的特异性。构建EGFR高表达的肿瘤细胞（人结肠癌HT-29细胞、人非小细胞肺癌（MSCLC）A549细胞）裸鼠移植瘤模型,观察静脉注射国产C225对肿瘤生长的抑制作用,并评价其对肿瘤细胞诱导凋亡和增殖抑制作用。国产C225对肿瘤细胞生长抑制影响试验结果显示,EGFR高表达的人乳腺癌MCF-7细胞、人结肠癌HT-29细胞和人非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞对受试药物敏感,产生抑制生长作用,其作用强度与药物浓度正相关。而EGFR不表达的人胃癌BGC-823细胞、人食管癌Eca109细胞和人舌癌KBV-200细胞对受试药物不敏感,无生长抑制作用。本研究首次证实在EGFR高表达的人非小细胞肺癌（NSCLC）A549裸鼠移植瘤模型中单独应用国产C225或与卡铂联合应用可以抑制肿瘤生长。研究结果显示单独应用国产C225或卡铂具有一定的抗肿瘤作用,但相对肿瘤增殖率T/C（%）不理想;但联合应用国产C225和卡铂后,可显著抑制肿瘤的生长,在给药期间甚至可以完全抑制肿瘤的生长,两次实验的相对肿瘤增殖率T/C（%）分别为10.7%（P＜0.01）和8.9%（P＜0.01）。本研究证实在人结肠癌HT-29裸鼠移植瘤模型中联合应用国产C225和CPT-11可以抑制表皮生长因子受体,重要的是,HT-29结肠癌裸鼠移植瘤模型对单独应用的国产C225或Erbitux敏感性都很差,单独应用CPT-11的敏感性也比较差,但当国产C225和CPT-11联合应用后,抗肿瘤作用大大提高,两次实验的相对肿瘤增殖率T/C（%）分别为20.0%（P＜0.05）和19.0%（P＜0.05）。这种联合疗法对于CPT-11耐受的结直肠癌具有很好疗效,这与国外报道的结果比较吻合。应用国产C225和CPT-11联合治疗,对人结肠癌HT-29细胞抑制增殖和诱导凋亡作用的影响研究结果显示,联合应用国产C225和CPT-11,对肿瘤细胞有很好的诱导凋亡作用和抑制增殖作用。国产C225与CPT-11联合疗法的凋亡指数/增生指数比,是单独使用国产C225或CPT-11的4.3倍以上。研究结果提示国产C225和CPT-11联合治疗抗癌活性的增强,归功于干扰肿瘤细胞的细胞增殖、细胞凋亡和可能的血管形成机制,准确机理还不明确仍需更深入的研究。第二部分:国产重组C225药物代谢动力学研究。采用BIAcore3000比较国产C225和国外参比品Erbitux与可溶的重组人EGFR的结合动力学。并以之为基础,建立和确证BIAcore定量分析食蟹猴血清中国产C225浓度的方法。研究单次低、中、高(7.5 mg.kg^-1、24 mg.kg^-1、75 mg.kg^-1)三个剂量静脉滴注给药后,和低剂量(7.5 mg.kg^-1)连续4次静脉滴注给药后,国产C225在食蟹猴体内的药物代谢动力学情况,并比较低剂量给药后C225与同剂量的Erbitux给药后的药动学特征。国产C225与可溶的重组人EGFR的结合动力学K_A为4.00×10⁸ 1/M,K_D为2.50×10^-9M。国外对照Erbitux与可溶的重组人EGFR的结合动力学K_A为4.25×10⁸ 1/M,K_D为2.35×10^-9M,在与EGFR的结合动力学特性上,国产C225与Merk KGaA公司生产的Erbitux与EGFR的结合动力学特性相似。建立BIAcore定量分析食蟹猴血清中国产C225浓度的方法,该生物定量分析方法专一性好,测定结果不受基质及类似蛋白干扰。测定的标准曲线浓度范围为0.500-50μg.mL^-1,LLOQ为0.500μg.mL^-1。该方法的日内和日间精密度、准确度考察均符合药代动力学生物样品分析方法学要求。可用于食蟹猴血清中国产C225浓度的测定。食蟹猴单次静脉滴注低、中、高三个剂量(7.5 mg·kg^-1,24 mg·kg^-1,75mg·kg^-1)的国产C225后,多数食蟹猴在给药后0.5h血清药物浓度达到最高,血清药物浓度随着滴注剂量的增高而增高,末端相半衰期随着剂量的增加而显著延长,低剂量组在给药后312h,中、高剂量组在给药后456h,血清药物浓度下降到峰浓度的1/20。对各组药代动力学参数比较,平均驻留时间MRT随着剂量的增加而显著延长。剂量之比为1:3:10,AUC的增长为1:7.2:18.7,不呈剂量正比倍数增加,而全身清除率CL_S随剂量增加而降低,呈典型的非线性动力学特征,同时也说明国产C225在高剂量给药后呈饱和消除特征,提示在7.5-75 mg·kg^-1剂量范围内,国产C225在食蟹猴体内呈非线性药代动力学。根据其表观分布容积判断,C225主要存在于血清。食蟹猴间隔7天静脉滴注低剂量(7.5mg·kg^-1)国产C225,连续4次给药后,第4次给药后的血清药物浓度和药物代谢动力学参数跟首次给药比较,无统计学意义上的差别,三只猴第4次给药后和首次给药后,给药间期的AUC_0-1比值(AUC_{（0-1）（第4次）}/AUC_{（0-1）（第1次）})分别为1.1、1.1和0.95;平均1.01±0.08,表示在7.5mg·kg^-1剂量下间隔7天连续给药4次后无药物积蓄作用。食蟹猴静脉滴注参比制品Erbitux和受试制品国产C225实验结果显示,各猴的Erbitux药-时曲线和国产C225药-时曲线,就总体而言,图形较为吻合。对3只猴的各时间点的参比品浓度和受试品浓度进行Student’s配对t-检验,在给药后所有时间点受试品与参比品平均浓度均无统计学上的意义差别（P＞0.05）。而药代动力学结果提示,二者所有的药物代谢动力学参数(AUC_（0-408h）,MRT,t_1/2,CL_S,V_SS,C_max)均无统计学意义（P＞0.05）,表明国产C225与Merck KgaA公司的Erbitux药物代谢动力学行为相近。