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目的:本研究旨在通过静电纺丝制备缓释bFGF(碱性成纤维生长因子)的取向与随机纳米纤维膜支架,通过体外成腱分化及体内肌腱再生,探讨制备的聚己内酯纳米纤维膜支架对损伤肌腱修复的可行性,从而为肌腱组织再生提供了一种有前景的支架。方法:第一部分,首先利用去溶剂法制作了BSA纳米微粒(NPs)及负载bFGF的BSA纳米微粒(bNPs),然后通过静电自组装在纳米微粒上制作壳聚糖外壳。并将bNPs负载到PCL电纺纳米纤维中制备了负载bFGF的取向与无取向电纺纳米纤维膜支架,分别检测了纳米纤维膜的载生长因子效率、载生长因子量及体外生长因子释放曲线。将人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)分别接种至各组电纺纳米纤维膜表面,以CCK-8法及活细胞染色验证纳米纤维膜的细胞毒性与细胞在支架表面的铺展;利用qPCR与WB检测成腱基因及蛋白的表达。第二部分,利用动物实验研究了负载bFGF取向纳米纤维膜修复大鼠跟腱2 mm缺损的效果,将hAMSCs接种到不同组纳米纤维膜支架上培养4d,而后植入到大鼠跟腱缺损模型中。术后3d、4周和8周,利用MRI观察修复情况;术后4,8周,利用qPCR及WB检测体内成腱基因与蛋白表达,组织学观察修复效果。结果:1、通过去溶剂法制备载bFGF的BSA纳米颗粒,通过静电自组装形成壳聚糖稳定的纳米颗粒,透射电镜及扫描电镜结果显示纳米颗粒较均匀。包载bFGF的壳聚糖稳定的纳米微粒直径约146nm,而纯牛血清白蛋白纳米微粒直径约205nm。2、成功将纳米微粒携载到PCL纤维膜中,制作了载bFGF的不同取向的纤维膜支架,透射电镜证明了载纳米颗粒的结构,扫描电镜证明了纳米纤维的排列方式。体外药物释放证实,该支架能够达到持续释放的功能。力学性能测试发现所有取向纤维的力学强度好于同等无取向纤维膜。体外细胞活性及增殖结果表明,各组支架相对空白对照组均达到了80%以上,说明材料对细胞基本无毒,在各组支架上细胞活性良好。活死细胞染色结果表明细胞形态良好,且与纤维的走向基本一致。培养4天与1天相比,具有明显的增殖活性。体外腱性基因和蛋白检测发现,载bFGF的取向纳米纤维膜支架组(aPCL+bFGF)具有最好的成腱细胞能力。3、然后考察了载bFGF的取向纳米纤维膜支架用于大鼠跟腱缺损模型的修复能力,成功将不同组PCL-hAMSC构建体植入缺损模型中。植入4周、8周后,通过再生跟腱的大体形态和解剖图进行宏观评估,通过MRI观察了肌腱的修复情况,载bFGF取向纳米纤维膜支架(aPCL+bFGF)修复效果最好。qPCR和western blot及免疫荧光染色结果表明,各组均不同程度表达成腱相关基因和蛋白,其中aPCL+bFGF组表达量最高,具有较强的成腱能力。组织形态学结果进一步表明,aPCL+bFGF组修复最好,说明具有缓释的定向纳米纤维支架为促进肌腱愈合提供了一种新的生物学途径。结论:1、通过静电纺丝技术成功制备了具有包载bFGF纳米颗粒的取向与无取向纳米纤维膜支架,并表征了其理化性质。2、通过体外实验证实,与其他各组相比,载bFGF的取向纳米纤维膜支架能够促进成腱相关基因和蛋白的表达。3、动物体内修复实验证实,负载bFGF的取向纳米纤维膜支架可促进肌腱的分化,这些结果验证了利用静电纺丝技术制备仿生取向纳米纤维膜支架的可行性,为肌腱组织工程支架的选择提供了参考。