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课题组在前期研究中发现了一种新型蛋白c1orf109。在之前的工作中,发现此蛋白本身存在多个磷酸化位点,是CK激酶的底物。细胞系蛋白水平分析结果则显示c1orf109蛋白的水平在多个癌细胞系内显著增加,说明其表达与细胞的癌变进程可能存在潜在联系。在前期的co-IP实验中发现c1orf109蛋白具有与cyclin D1启动子结合的能力。为了验证这种结合能力是否是c1orf109蛋白调控cyclin D1基因表达的途径,从而是否能够解释c1orf109在细胞内的水平和癌细胞增殖之间的关系,本研究主要研究了c1orf109对cyclin D1启动子序列是否会产生作用并影响cyclin D1蛋白的表达,以及这一作用若存在的情况下其在cyclin D1启动子序列上的主要作用区域方面的内容。实验中首先使用了生物信息学手段对cyclin D1启动子序列进行了分析,并和已经同c1orf109蛋白结合的序列区域进行了对比,最终将cyclin D1启动子分为了六个片段。这些cyclin D1启动子片段随后被连入PGL-3 basic荧光报告质粒内,得到的重组质粒在转染入He La细胞后,受内源性c1orf109蛋白刺激表达了不同水平的荧光素酶。同时为了控制He La细胞内的c1orf109蛋白的表达水平,实验使用了RNA干扰的方法,并通过western blot检测发现所使用si RNA能够降低细胞内c1orf109蛋白的水平。最后,荧光报告重组质粒被转染入通过si RNA干扰造成c1orf109水平不同的几组He La细胞内,并检测了荧光素酶的表达水平。实验结果显示重组了-881-15bp和-316-15bp的荧光报告质粒所表达的荧光素酶水平较高,且受c1orf109水平下降而出现的下降最为明显。这些结果证明了c1orf109对cyclin D1基因表达上调的作用,并确定了这一过程的机理是通过c1orf109蛋白同cyclin D1启动子序列的相互作用达成的。实验最终确定了c1orf109在cyclin D1启动子序列上能够产生作用的大致范围,为进一步明确这种调控表达的机制,并为阐明c1orf109作用的转录调控元件序列信息提供了线索。