论文部分内容阅读
传统的酶解法收集细胞会损坏细胞膜蛋白并且细胞活性低,利用聚(N-异丙基丙烯酰胺)(pNIPAAm)温敏涂层来收集细胞可以克服这种缺陷,而且可以获得完整的细胞层。然而目前使用的温敏表面都是连续的,细胞是否可以在非连续的温敏表面上脱附?如果可以,是否会存在一个临界值?为了解决上述问题,本论文以聚(N-异丙基丙烯酰胺-苯乙烯)(pNIPAAm-St)微凝胶为基质,经过旋涂在PEI预处理的玻璃片表面上形成微凝胶单层膜,采用负性微接触印刷法制备图案化的微凝胶表面,用以探究细胞黏附基底上图案化温敏结构对单细胞或细胞层脱附的影响。单细胞临界脱附面积的确定。本部分的工作是细胞黏附基底上构建直径3-10μm的微凝胶圆,圆心之间的间距9-20μm之间。通过接种小鼠成纤维细胞(NIH3T3)研究单细胞脱附行为,结果表明NIH3T3可以从非连续的温敏表面脱附,而且图案化的温敏表面面积只要占细胞粘附面积的20%以上即可。细胞层临界脱附面积的确定。与单细胞不同,细胞层由于存在细胞-细胞之间的相互作用,其与基底的相互作用要相对复杂。我们设想如果细胞层间的相互作用力大于细胞与黏附基底之间的相互作用力,在温敏区上脱附的细胞片层有可能会拉着粘附区的细胞片层共同脱落,最终形成再培养完整的细胞层。温敏条带的临界值以及其与非温敏区间距的临界比值是可能存在的。因此我们构建条纹状图案结构用于研究细胞层脱附的临界面积。结果表明非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7)优先选择在非温敏区域黏附增殖,形成图案化细胞层,随后增殖缓慢迁移到温敏区形成连续的细胞层。在500μm内,当温敏条纹的宽度大于或等于非温敏区域间距时,可以获得完整的COS7细胞层。其他的小鼠成纤维细胞(NIH3T3),人胚肾细胞(293E),小鼠成纤维细胞(L929)生长行为类似,都优先选择在非温敏区域生长,随后迁移到温敏区形成整个细胞层。但是由于这几种细胞与细胞之间连接不紧密无法获得完整细胞层。如果将非洲绿猴肾成纤维细胞(COS7)和人宫颈癌细胞(Hela)逐次接种,两者形成一个共培养的细胞层后共同脱落,这种不需支撑的细胞片层可推进药物靶向和治疗的肿瘤模型的研究。