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目的:探讨钙敏感受体(Calcium sensing receptor,CaSR)在人单核巨噬细胞株THP-1中的表达与功能。
方法:首先将人单核细胞株THP-1用佛波脂(PMA,160nmol/L)诱导,使之转化为具有贴壁能力的巨噬细胞株THP-1(以下简称THP-1)。通过形态学观察以及TRAP染色鉴定THP-1细胞成功分化为巨噬细胞。用Western blot法检测CaSR在THP-1中有无表达;用免疫荧光法检测CaSR在THP-1中细胞定位:用激光扫描共聚焦显微镜观察CaSR激活后细胞内钙的变化及其信号通路;用ELISA法检测CaSR的激活对THP-1分泌细胞因子IL-IB、TNFa的影响;WB检测CaSR的激活对THP-1细胞NFKB信号通路相关蛋白的影响。
结果:形态学以及TRAP染色结果证明THP-1细胞成功分化为巨噬细胞:CaSR在THP-1的细胞浆和细胞膜均有分布,但主要分布在细胞膜;钙离子和CaSR特异激动剂氯化钆(GdCl3)处理THP-1,呈浓度依赖性促进细胞内钙离子浓度的上升;该作用可被磷脂酶C(PLC)抑制剂U73122(10μmol/L)和内质网钙泵抑制剂TG(thapsigargiN,10μmol/L),以及NPS2390(CaSR特异抑制剂)消除;用脂多糖(LPS,1mg/L)处理后,THP-1细胞培养上清液中IL-1β、TNFα的含量均明显高于未处理组;GdCl3处理THP-1细胞,细胞培养上清液中IL-1β、TNFα,的含量亦明显升高,但该作用可被NPS2390(10μmol/L)所抑制,其机制可能为CaSR通过激活NFKB信号通路促进细胞因子的生成。
结论:CaSR在人单核巨噬细胞株THP-1中有功能性表达。它提示钙敏感受体激活可能参与涉及单核巨噬细胞激活的各种疾病。