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近期的相关研究发现,从少数HIV-1长期感染者体内能够分离出具有广谱中和活性的抗体。其中中和活性较强的2F5,Z13e1,4E10和10E8抗体表位位于HIV-1 gp41上的近膜区MPER(membrane-proximal external region)上。以上研究结果显示,MPER有可能成为研发有效的HIV-1疫苗的理想靶标。但由于MPER多肽免疫原性差、构象多变、多种广谱中和抗体对应表位需要膜脂环境等原因,使得以MPER多肽作为抗原诱导出具有相似广谱中和活性的抗体非常困难。10E8抗体是MPER表位上广谱中和活性最强的抗体。在本研究中,我们尝试以10E8抗体和识别表位的结构信息为依据,对表位进行化学修饰,达到提高抗原多肽免疫原性和构象稳定性的目的,希望借此可以诱导具有相似广谱中和活性的10E8样抗体。首先我们对10E8抗体表位进行精确的构象设计和多肽合成。我们通过化学修饰将10E8抗体识别表位的两个氨基酸替换成(s)-α-(2’戊烯基)丙氨酸,它们会在烯烃复分解催化反应下形成烯烃桥键,从而固定多肽的α-螺旋结构,模拟抗体表位的天然构象。我们将该抗原与破伤风毒素的辅助性T细胞表位通过柔性铰链区PEG2进行融合,由此得到10E8表位构象型免疫原T10HE。然后我们对该免疫原进行物理性质、化学性质和免疫性质的检测,验证构象型免疫原T10HE免疫的可行性。酶联免疫吸附反应(ELISA)和表面等离子共振(SPR)验证了化学修饰的T10HE与10E8抗体的结合能力没有受到影响。在小鼠模型上,T10HE初免并假病毒JRFL加强免疫的策略成功诱导出了10E8样中和抗体。更重要的是,与对照组相比相比,该免疫策略所诱导出的10E8样抗体滴度和亲和力更高、抗体分型多样化优势更明显,并在假病毒感染的抑制实验中体现出更强的中和能力,针对X4和R5嗜性的HIV-1毒株表现一定的广谱中和活性和交叉保护性。综上所述,我们使用基于10E8表位的构象型多肽免疫原进行疫苗初免,模拟天然10E8表位构象诱导出10E8样中和抗体,为HIV疫苗构象型疫苗的发展提供了支持和依据,为疫苗设计中诱导出中和抗体提供了一个新思路和方法。